T5 Exonuclease是一种沿5'→3'方向降解DNA的核酸外切酶。它既能从DNA 5'末端起始消化，也可以从线性或环状双链DNA的缺口(gap)或缺刻(nick)处起始消化，但不会降解超螺旋双链DNA。可应用于无缝克隆（同源重组克隆）、降解碱裂解提取质粒中的变性DNA等。

图1. T5 Exonuclease原理图

无缝克隆

无缝克隆是目前常用于生物学研究的分子克隆技术，它基于DNA同源序列的互补配对，通过酶类的介入，将这些互补配对的DNA片段连接起来，从而形成完整的双链DNA。其组装主要利用了T5 Exonuclease、Phusion高保真DNA聚合酶与Taq DNA连接酶之间的协同作用。这三个酶作用过程大致如下：

切割：T5 Exonuclease从DNA片段的5'端切割一条链，产生DNA 3'突出末端。之后互补的DNA片段同源末端进行退火配对结合，形成一个有间隙的环状DNA；
填补：Phusion DNA高保真DNA聚合酶通过DNA合成填补间隙，产生一个只有缺刻的环状DNA；
连接：Taq DNA连接酶通过形成磷酸二酯键修复缺刻，得到一个完整的双链DNA，也就是完整的环状质粒。

图2. 无缝克隆原理图^[1]

翌圣T5 Exonuclease

部分数据展示

01

应用到无缝克隆，阳性克隆100%

使用T5 Exonuclease进行无缝克隆，分别连接2、3、4个片段，实验结果表明，翌圣T5 Exonuclease运用到无缝克隆中，阳性克隆率可达100%（12/12）。

图3. 无缝克隆效果图

02

无切口酶残留

将30 U不同批次的T5 Exonuclease分别与相应的底物DNA在37℃孵育4 h，琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，翌圣T5 Exonuclease无切口酶残留。

图4. 切口酶检测

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