上新 | RecJ核酸外切酶（RecJ Exonuclease）：高效特异性降解ssDNA
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2026-05-06
在小RNA测序和靶向捕获测序中，如何有效去除背景干扰、富集目标信号是决定数据质量的核心环节。未连接的游离接头和非目标单链DNA是导致测序背景高、有效数据率低的主要因素。翌圣生物新推出的RecJ Exonuclease（Cat#14273ES），凭借其对单链DNA（ssDNA）的高度特异性降解能力，为这一挑战提供了精准高效的解决方案。
RecJ Exonuclease来源于大肠杆菌，是一种镁离子（Mg²⁺）依赖性的核酸外切酶。其核心功能在于高度特异性识别并作用于ssDNA。它能从线性ssDNA的5'端起始，严格沿5'→3'方向逐步切割，释放核苷酸。同时，该酶也能有效作用于双链DNA（dsDNA）中长度超过6个核苷酸的5'突出末端（5'-overhang），无论末端是磷酸基团（5'-P）还是羟基（5'-OH）均可被降解，且对RNA无活性。这种对ssDNA的严格选择性与方向性，使其成为在复杂核酸混合物中精准去除特定干扰分子的理想工具。
图1. RecJ Exonuclease作用原理图
凭借其独特的底物特异性与方向性，RecJ Exonuclease已成为多种分子生物学实验的得力工具：
➡ 小RNA测序中的接头去除：在3'端接头连接后，RecJ Exonuclease可与5' deadenylase协同，通过级联消化机制彻底去除未连接的游离接头。RecJ Exonuclease专门降解被上游酶处理产生的接头ssDNA片段，而不会影响已成功连接到目标小RNA上的接头，从而显著降低无效测序，提升文库的有效数据产出。[1]
➡ 靶向捕获测序中的背景ssDNA去除：在非对称扩增等策略中，RecJ Exonuclease可选择性消化因扩增偏差产生的非目标ssDNA背景（如缺乏完整引物位点的片段），同时保留完整的目标双链DNA分子。这一步骤能有效降低测序背景噪音，提高目标区域的覆盖深度和检测灵敏度，助力精准分析基因组特征。[2]
高纯度保障：产品蛋白纯度≥95%，极大减少了杂蛋白对酶促反应的干扰，确保结果稳定可靠。
活性高：对底物消化效果优于进口品牌，可高效完成底物降解，提升实验效率。
卓越的底物特异性：严格作用于ssDNA及特定末端结构，对完整平末端dsDNA无影响，有效避免非特异性切割。
低残留：切口酶、RNase酶残留极低，适用于对纯度要求严苛的各类下游应用。
便捷的热失活特性：65℃加热20 min即可使酶完全失活，便于反应终止与后续实验步骤的进行。
高效降解ssDNA
在50 µL反应体系中加入1 μg 500 nt ssDNA 片段，与进口品牌Supplier A*产品分别进行酶切反应。结果显示，翌圣产品对目标底物的降解效果优于进口品牌。
图2. 翌圣与进口品牌Supplier A*的RecJ Exonuclease对ssDNA消化效果比较
对平末端dsDNA无降解效果
在相同条件下处理1 μg 500 bp的平末端dsDNA，结果显示，与进口产品一致，翌圣产品对该dsDNA底物均无显著降解，充分验证了其严格的特异性。
图3. 翌圣与进口品牌Supplier A*的RecJ Exonuclease对平末端dsDNA消化效果比较
切口酶、RNase酶残留低
将翌圣高浓度（90 U）的RecJ Exonuclease与核酸底物共孵育，电泳检测证实，产品中切口酶与RNase的残留水平极低，有效避免了非目标核酸的意外降解。
图4. 翌圣RecJ Exonuclease切口酶、RNase酶残留检测结果
便捷的热失活特性: 65℃处理20 min即可使酶完全失活
将RecJ Exonuclease于65℃预处理20 min（蓝色）后，其降解ssDNA的活性完全丧失，证明可通过简单加热步骤轻松失活，便于实验流程控制。
图5. 翌圣RecJ Exonuclease灭活条件验证
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产品名称 |
产品货号 |
特性 |
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RecJ Exonuclease |
5'→3'高效降解单链DNA释放单核苷酸 |
为满足不同实验场景下的核酸外切酶需求，翌圣生物提供完整的核酸外切酶产品矩阵，覆盖3´→5´、5´→3´等不同酶切方向，适配引物去除、无缝克隆、环状RNA富集等多元应用，一站式解决科研痛点。
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产品名称 |
产品货号 |
特性 |
典型应用 |
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RecJ Exonuclease |
5'→3'高效降解单链DNA释放单核苷酸 |
小RNA测序中的接头去除、靶向捕获测序中的背景ssDNA去除 |
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Lambda exonuclease |
5'→3'高效降解双链DNA释放单核苷酸，底物需要是5'磷酸化的双链DNA |
单链DNA制备、质粒变性DNA降解 |
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Exonuclease I |
3'→5'水解单链DNA，不作用双链DNA/RNA |
PCR引物去除、单链DNA纯化 |
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Exonuclease III |
作用于双链DNA，从3'-OH末端方向逐步切去单核苷酸 |
非定向巢式缺失、定点突变、链特异性探针制备、ssDNA制备 |
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T5 Exonuclease |
5'→3'降解DNA，不作用超螺旋双链 |
无缝克隆、质粒变性DNA降解、消化未环化的线性模板 |
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T7 Exonuclease |
5'→3'降解双链DNA或RNA/DNA杂交双链，释放单核苷酸 |
无缝克隆、单链DNA制备、消化未环化的线性模板、质粒变性DNA降解 |
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RNase R |
3'→5'核糖核酸外切酶，能消化所有的线性RNA，不易消化呈环形的RNA、套索结构或3’端突出末端少于7个核苷酸的双链RNA |
富集环状RNA |
参考文献：
[1] Tewari M, Galas D J, Giraldez M D, et al. Library Preparation for small RNA sequencing using 4N adapters: In house 4N Protocol B[J]. 2018.
[2] Kvikstad E M, Piazza P, Taylor J C, et al. A high throughput screen for active human transposable elements[J]. BMC genomics, 2018, 19(1): 115.
