产品简介

 

CelCulSF^TM Mesenchymal Stem Cell（MSC）Culture Medium（Serum-free）培养基是专为人类间充质干细胞（包括脐带间充质、骨髓间充质、脂肪间充质、脐带血间充质等干细胞）设计的一款标准化生产、无异种动物源、无血清的培养基。与传统添加动物血清的培养基相比，间充质干细胞（MSC）无血清培养基能维持间充质干细胞的无分化生长， 保持细胞的形态特征和正常的染色体核型等，保证间充质干细胞的高增殖率以及分化潜能。

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	40144ES76
40144-A	间充质干细胞（MSC）基础培养基（无酚红）	500 mL
40144-B	间充质干细胞（MSC）添加物	25 mL

 

成分说明

 

无血清培养基和添加物均无异种动物源成分、无抗生素、无酚红，含谷氨酰胺。

 

储存条件

 

间充质干细胞（MSC）基础培养基（无酚红），2~8℃，有效期18个月；

间充质干细胞（MSC）添加物，-20℃，有效期18个月。

 

使用说明

 

一、MSC完全培养基的配制

1. 间充质干细胞（MSC）添加物置于37℃水浴锅中至完全融化后立即拿出，若出现少量絮状物或浑浊为正常现象，不会影响细胞培养性能，建议离心去除絮状物（3400 g，3 - 5 min），直接使用或分装储存于-20℃，避免反复冻融。
2. 将25 mL间充质干细胞（MSC）添加物加到500 mL间充质干细胞（MSC）基础培养基（无酚红）中，彻底混匀。

二、原代细胞培养（以脐带来源为例）

1. 脐带洗涤：无菌有齿镊转移脐带至10 cm无菌培养皿中，用医用碘伏消毒整根脐带外表面，转入新的平皿中，加入75%乙醇浸没整根脐带，消毒灭菌后，转入新的平皿中，加入5 - 10 mL氯化 钠注射液冲洗，重复2～3次，去除血渍。
2. 无菌组织剪将脐带剪成约2～3 cm数段，加入5 - 10 mL氯化钠注射液洗涤血凝块，重复洗涤直至基本去除血渍，洗涤液较清澈。
3. 剔除血管：按血管螺旋走式剔除脐带的两条动脉，一条静脉。
4. 分离华通氏胶：用有齿镊将华通氏胶撕下，放入无菌平皿中，加入5 - 10 mL氯化钠注射液，洗涤胶体。
5. 洗涤胶体：将获得的胶体转移至50 mL 离心管，加氯化钠注射液20 - 30 mL,轻轻晃动，2000 rpm、5 min。
6. 胶体称重：上清液弃去，称重记录。
7. 组织匀浆：胶体中加入2～3 mL培养基，用无菌组织剪，在离心管中将组织剪切成组织匀浆块，2000 rpm、5 min离心，去除上清。
8. 根据胶体重量，加入适量完全培养基，定容，吹打均匀，按照每瓶0.5 g接种到培养瓶（T75瓶）中，每瓶8 - 10 mL培养基（T75瓶）培养。
9. 平置培养瓶使组织块尽量均匀分布于整个底面，将培养瓶放置于二氧化碳恒温恒湿培养箱。培养条件：37±0.5℃，CO₂体积分数为5±0.2% 。
10. 培养第7天，全量换液，合并收集组织块，离心上清液弃掉。新鲜完全培养基重悬组织块，均匀种瓶。
11. 细胞可见时间5 - 9天，细胞可收获时间10 - 14天。
12. 3个以上组织块附近细胞融合度达85%以上，细胞可收获，倒出培养上清，使用生理盐水清洗培养瓶底面1~2遍，使用0.05%胰酶或重组细胞消化液消化细胞，终止消化后，收集细胞悬液至离心管，细胞液过细胞筛网去除组织，450g，5 min离心，沉淀即为原代收获细胞。

三、MSC传代细胞培养

1. 取复苏或传代收获的MSC，进行计数。
2. 用配制好的完全培养基重悬细胞，根据铺瓶密度进行铺瓶培养。

铺瓶密度：P1 - P3代细胞铺瓶密度4000 - 6000 个/cm²，P3 代以上传代细胞铺瓶密度6000 - 8000个/cm²。

铺瓶体积：T25瓶，每瓶铺瓶体积5 mL；T75瓶，每瓶铺瓶体积13 mL；T175瓶，每瓶铺瓶体积30 mL。

细胞铺瓶后，晃匀后放置37℃，二氧化碳培养箱中培养。

3. 细胞培养时间72 h，观察细胞融合度达85%以上，倒出培养上清，使用生理盐水清洗培养瓶底面1~2遍，使用0.05%胰酶或重组细胞消化液消化细胞，终止消化后，收集细胞悬液至离心管，450 g，5 min离心，沉淀即为收获细胞。

 

注意事项

 

1. 间充质干细胞（MSC）添加物在37℃水浴锅复融，复融后直接使用或分装储存于-20℃，避免反复冻融。
2. 间充质干细胞（MSC）添加物复融后可能会出现少量絮状物或浑浊为正常现象，不会影响细胞培养性能，建议离心去除絮状物（3400g，3 - 5 min）。
3. 间充质干细胞（MSC）添加物可在-20°C至-40°C条件下进行长期储存到有效期结束，一旦化冻，可在4°C最多放置7天，配制成的完全培养基可在4度条件下可稳定放置14天。
4. 本产品仅作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20241016