产品简介

 

萤火虫萤光素酶（Firefly luciferase）是一种分子量约为61 kDa的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，能够催化萤光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在氧化的过程中会发出波长为560 nm左右的生物萤光。

检测原理如图所示：

                              图1：萤火虫萤光素酶检测原理图

翌圣生物Steady-One Step 萤光素酶报告基因检测试剂盒的特点是操作简便，半衰期可持续5 h以上。尤其在前2 h发光值变化较小。适合于超高通量或384孔板检测。实验前无需对细胞进行清洗或收集，可以直接使用，细胞裂解和检测一步完成，省去了混合试剂的步骤，节省了实验时间。

本产品测定样品的线性范围宽。96孔板中，可以在20万个细胞范围内呈现良好的线性关系。

 

组分信息

 

组分名称	11413ES60	11413ES80	11413ES81
Steady-One Step 萤光素酶报告基因检测试剂	10 mL	10×10 mL	100 mL

 

储存条件

 

-80ºC避光保存，未开封试剂有效期一年；如果-20ºC避光保存，推荐2个星期以内使用。拆封后推荐分装（避光）。

 

使用说明

 

一、实验准备

1. 主要实验耗材与设备：200 μL 移液器或者排枪；不透光白色酶标板或黑色酶标板；多功能酶标仪或者其他能够检测生物发光的仪器。
2. 反应温度：酶促反应对温度较为敏感，请将细胞培养板，检测试剂，酶标仪（可在机器设定温度）平衡至室温（最好20-25℃）时再使用；检测试剂复温环境不能超过25℃。

注：培养箱中取出培养板，室温放置20 min以平衡至室温。检测试剂解冻后要完全恢复到室温再使用。

3. 检测仪器设置：根据实验室所用仪器，设置对应参数即可。
4. 检测板：为防止孔间干扰，推荐使用不透光白色酶标板或者黑色酶标板；如测量光度值较高，为避免互相干扰，也可隔孔上样。
5. 实验中请穿实验服并戴一次性手套。

二、实验步骤（以96孔板为例）

      1.裂解细胞

       a.贴壁细胞：推荐汇合度在90%以上。不用吸除细胞培养基，通常加入与培养基同体积的混合试剂即可。

       b.悬浮细胞：只要细胞生长良好，一般无密度要求。其他同贴壁细胞。

推荐使用量

细胞培养皿	384孔板	96孔板
培养基体积	25 μL	100 μL
添加试剂体积	25 μL	100 μL

3. 直接加入试剂后用枪头吹打5次，使细胞裂解更充分。等待5 min，使细胞充分裂解。
4. 用枪头吹打时尽量不要有泡沫和气泡出现。

2. 上样

每孔吸取100 μL混合液（检测试剂+细胞培养基）到检测板。

3. 荧光检测

设置酶标仪参数（参考 实验准备 3）。将检测板放入酶标仪，震动几秒，检测即可。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 温度影响：温度直接影响荧光素酶的反应速率。而发光强度和半衰期取决于荧光素酶的反应速率。所以在加样前，应将需要将本试剂盒细胞培养板均平衡至室温，以保证检测结果的一致性。如将多孔板堆叠放置，将需要更长时间恢复到室温。如未充分平衡，可导致中心孔和四周孔之间的梯度效应。

 

Ver.CN20240813