荧光定量PCR案例|HeLa细胞基因表达分析
样本&试剂&仪器平台
|
样本来源 |
HeLa细胞 |
|
试剂信息 |
|
|
仪器信息 |
Bio-Rad CFX96 |
扩增片段CG含量&长度
|
GC含量 |
46% |
|
目标扩增长度 |
80bp |
反应体系
采用翌圣生物反转录试剂11141ES，取不同量的total RNA进行反转录，反转录体系是10μl。取1μl cDNA作为模板进行qPCR。
|
组分 |
体积 （μL） |
|
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) |
10 |
|
Forward Primer (10 μM) |
0.4 |
|
Reverse Primer (10 μM) |
0.4 |
|
模板DNA/cDNA |
1 |
|
无菌超纯水 |
Up to 20 |
反应程序
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
1 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
40 |
|
退火 |
57.3℃ |
15 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
30 sec |
|
|
熔解曲线阶段 |
仪器默认设置 |
1 |
|
扩增曲线&熔解曲线
扩增曲线呈现S型曲线，熔解曲线峰型单一，无非特异扩增。
文末福利
特别推荐 Yeasen青出于蓝系列显色示踪qPCR Mix
扫描上方二维码填写收件信息，即可免费获得相关产品试用装。
