Cebrary^® Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠肠类器官生长培养基是一种无血清可应用于小鼠肠干细胞（如肠隐窝）来源的类器官的建立和长期培养过程，在细胞外基质存在的条件下，培养基所含特有组分及丰富的细胞因子能促使肠隐窝干细胞迅速生长成并形成肠类器官，类器官形成过程平稳且迅速，同时保持较高的肠隐窝干细胞特性和活力，为后续基于类器官的肠生理功能、疾病研究和精准医学提供支持。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		41426ES60	41426ES76
41426-A	Intestinal Organoid Growth Basal Medium (Mouse) 小鼠肠类器官生长基础培养基	80 mL	400 mL
41426-B	Nutritional components 1（10×）营养组分1（10×）	10 mL	50 mL
41426-C	Nutritional components 2（10×）营养组分2（10×）	10 mL	50 mL

 

保存方法

-25℃ ~ -15℃储存，有效期1年。

 

产品应用

无菌操作条件下配制小鼠肠类器官完全培养基。以下是准备100 mL完全培养基操作流程，如所需量不同，可相应调整用量。

1. 将营养组分1和营养组分2室温解冻或者2-8℃过夜缓融。避免反复冻融，现配现融；

2. 将基础培养基80 mL冰箱取出恢复至室温；

3. 将营养组分1和营养组分2各10 mL加入到基础培养基内，均匀混合；如暂不使用，短时2-8℃储存。

4. 使用时可加入1%双抗使用。

 

小鼠肠原代培养

1.样本制备：小鼠断颈处死，表面喷洒酒精杀菌。在无菌环境下截取出近胃端处3~15 cm肠组织，用镊子小心去除肠道外部的肠系膜、脂肪后并放入4℃预冷的含1%双抗DPBS溶液中。

2.样本清洗：使用注射器冲洗肠道2-3次，用手术剪将肠管小心剪开，肠腔面朝上，用手术刀片轻轻刮去肠腔表面肠绒毛，待肠绒毛被刮净后（呈现组织透明），将肠组织置于新的含DPBS的培养皿中清洗2~3次。

3.样本初处理：将清洗后的小肠组织剪碎至2 mm大小块状体，顺势转移至新的50 mL离心管中，用DPBS轻柔清洗3-5次，除去肠绒毛细胞和漂浮脂肪组织。

4.样本消化：在小肠碎片组织加入10-15 mL含有3-5 mM EDTA 的预冷 DPBS 中消化，4℃孵育 30 min左右，期间每10 min轻摇一次离心管。

5.消化完成后，弃去EDTA消化液上清，用新的DPBS缓冲液将组织轻柔漂洗2~3次以去除剩余的EDTA

6.在小肠组织碎片中加入10~15 mL预冷的含0.1%BSA的DPBS，反复吹打、重悬组织碎片，使隐窝与基底层分离，然后取少许悬液镜检，当发现有隐窝样结构后，停止吹打，并对吹打后的组织悬液使用70 μm滤网过滤并收集穿过滤网的组织悬液。

7.重复步骤5-6两次，1500 rpm、4℃离心 3 min。

8.混合物形成：用Ceturegel^®基质胶重悬隐窝组织沉淀，每10 μL基质胶悬液包含200~600个隐窝，重悬后混合液置于冰上，尽快操作以避免基质胶形成凝胶。

9.将混合悬液种植于24孔板底部正中央，每孔30~50 μL左右，避免悬液接触孔板侧壁。  

10.将种植后的培养板至于37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育30 min左右待Ceturegel™基质胶凝固。

11.待Ceturegel^®基质胶完全凝固后，沿壁缓慢加入已配制好的Cebrary^® Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠肠类器官生长培养基，每孔800 μL直至完全浸没混合物。

12.将24孔板置于37℃二氧化碳培养箱中培养。每3天更换一次新鲜培养基并观察类器官生长状态，一般小鼠小肠类器官在5~7天内形成。

 

注意事项

1. 产品的分装、使用等操作需在无菌环境下进行。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本产品仅供科研使用，禁止用于人体。

Ver.CN20230608