DiO(DiOC18(3)) 细胞膜绿色荧光探针

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COA

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产品描述

DiO是一种亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。进入细胞膜后,DiO在整个细胞膜上扩散,最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱,当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,被激发后可以发出绿色的荧光,具有很高的淬灭常数和激发态寿命。可以用标准的FITC滤光片检测。

DiO通常不会明显影响细胞的生存力,因此被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。除了最简单的细胞膜荧光标记外,还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

 

产品性质

同义名(Synonym)

DiOC18(3); DiO perchlorate; 3,3-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate

CAS 号(CAS NO.)

34215-57-1

分子式(Molecular Fomular)

C53H85ClN2O6

分子量(Molecular Weight)

881.72

外观(Appearance)

橘色至红色固体

Ex/Em

484/501 nm

推荐滤光器(Filter)

XF23-Omega, 31001-Chroma

纯度(Purity)

>97%

溶解性(Solubility)

溶于DMF,DMSO,乙醇

结构式(Structure)

image.png 

 

运输与保存方法

冰袋运输。产品-20 ºC干燥避光保存,有效期1年。

 

注意事项

1荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2染色固定的细胞或组织时,通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛固定,使用其它不适当固定液会导致荧光背景较高。

3为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

4本产品仅作科研用途!

 

使用方法

1. 染色液制备

1.1配置DMSO或EtOH 储存液:储存液用DMSO或EtOH配置浓度1~2 mM。

】:a、未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融,可稳定保存6个月。

b、发现较难溶解时可以适当加热,并用超声处理以促进溶解。

c、必须保证所用溶剂新鲜无水。

1.2工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储存液,配制浓度为1~5 μM的工作液。

】:工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。

2. 悬浮细胞染色

2.1加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。
2.237℃孵育细胞2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以2 min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。

2.3孵育结束,按1000~1500 rpm离心5 min。

2.4倾倒上清液,再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

2.5重复2.32.4步骤两次以上。

3. 贴壁细胞的染色

3.1将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

3.2从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。

3.3在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
3.437℃孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。

3.5吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10 min,然后吸干培养基。

4. 显微镜检测

4.1DiD,DiO,DiI,DiR和DiS滤光器的选择参见表1。

4.2多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定:

a) DiI和DiO=Omega XF52,Chroma 51004;

b) DiI和DiD=Omega XF92,Chroma 51007;

c) DiI,DiO和DiD=Omega XF93,Chroma 61005

1 相关产品性质

产品名称

货号

分子量

Ex/Em

推荐滤光器

DiO

40725ES10

881.7

484/501 nm

XF23-Omega, 31001-Chroma

DiI

40726ES10

933.87

550/567 nm

XF32-Omega, 31002-Chroma

DiD

40758ES25

959.91

644/663 nm

XF47-Omega, 31023-Chroma

DiR

40757ES25

1013.39

748/780 nm

XF112-Omega,41009-Chroma

 

HB220415

 

400-6111-883