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产品描述
DiI、DiO、DiD和DiR是一系列亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构，这是一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。这类染料具有很高的摩尔消光系数，极性依赖性的荧光和很短的激发寿命。
DiD是DiI的衍生物，具有明显往红光迁移的激发和发射光谱，这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。DiD可被633 nm的氦-氖（He-Ne）激光所激发，呈红色荧光，在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，进入细胞后，染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞染色。
产品性质
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英文别名（English Synonym） |
DiIC18(5); 1,1'-Dioctadecyl-3,3,3',3'-Tetramethylindodicarbocyanine Perchlorate |
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分子式（Formula） |
C61H99ClN2O4 |
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分子量（Molecular Weight） |
959.91 |
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Ex/Em(nm) |
644/663 |
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推荐滤光器 |
XF47-Omega，31023-Chroma |
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外观（Appearance） |
红色或紫色或深蓝色固体 |
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纯度（Purity） |
＞97%（TLC） |
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溶解性（Solubility） |
溶于DMF，DMSO，乙醇 |
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结构式（Structure） |
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运输和保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品-20 ºC干燥避光保存，有效期二年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
3）本产品仅作科研用途！
使用方法
1. 染色液制备
（1）配置DMSO或EtOH储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
注：
a、未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。
b、发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。
（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化
2. 悬浮细胞染色
（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。
（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。
（5）重复（3），（4）步骤两次以上。
3. 贴壁细胞的染色
（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。
（3）在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37℃孵育细胞2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。
（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：
a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；
b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；
c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005
表1 相关产品性质
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产品名称 |
货号 |
分子量 |
Ex/Em |
推荐滤光器 |
| DiO(DiOC18(3)) 细胞膜绿色荧光探针 |
40725ES10 |
881.7 |
484/501 nm |
XF23-Omega, 31001-Chroma |
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40726ES10 |
933.87 |
550/567 nm |
XF32-Omega, 31002-Chroma |
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40758ES25 |
959.91 |
644/663 nm |
XF47-Omega, 31023-Chroma |
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40757ES25 |
1013.4 |
748/780 nm |
XF112-Omega,41009-Chroma |
HB180709
