PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,体系中加入dNTP、Mg2+以及延伸因子、扩增增强因子,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。
图1. 聚合酶链式反应
一般来说,每一次PCR反应都要经过变性、退火以及延伸,各阶段所需时间各不相同,而延伸时间的长短直接决定了PCR的扩增速率。翌圣匠人通过不断创新,一代又一代的产品更迭,终于研发出了一款集快速、应用范围广于一体的全能快速PCR Mix(Cat#10157)。
1. 扩增速度快&检出率高
图2. 以人源基因组为模板,分别扩增长度为1, 2, 3, 4, 8 kb的目的片段。PCR反应条件使用本公司推荐的PCR反应条件。反应结束后,取4μl进行电泳=检测。Marker:15000bp DNA 。
2. 稳定性强&GC含量兼容性高
图3. 10157ES03置于37℃分别进行0d,7d,14d的产品稳定性测试,模板GC含量为30-70%。结果可以看出37℃放置14天产品性能依然稳定,且GC兼容性很强。M: 15000 DNA Marker
3. 灵敏度高
图4. 以8 kb人gDNA为模板进行基因组DNA扩增灵敏度测试。
4. 酵母简单裂解直扩
图5. 以简单裂解的酵母水溶液为模板进行扩增测试。条件:水煮5min后,取20μL酵母水溶液加入50μL体系中。
图6. 模板未经纯化,目的片段GC含量58.8%大小1034bp,样本来源为鼠尾(来自北京大学深圳研究生院)。
Q:PCR Mix扩增产物类型?
A:3'-A产物。可用于TA克隆。
Q: PCR Mix有没有3'-5的外切酶活性?
A:没有。
Q:PCR Mix校正因子矫正的是Taq酶吗?是什么成分?延长因子是什么?
A:校正因子校正的是错配碱基,它是一类具有校正活性的酶,延伸因子是帮助合成长片段的,是一个辅助蛋白。
Q:PCR Mix是否含SDS和溴酚蓝?
A:不含SDS,含溴酚蓝。
Q: 10157镁离子浓度,dNTP中浓度分别是多少?
A:镁离子终浓度1.5mM,dNTP 0.3mM。
Q:PCR mix 保质期多久?
A:-20℃,有效期2年。
Q: PCR mix稳定性测试结果?
A:反复冻融100次,37C放置14天,依然稳定。
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产品定位 |
产品名称 |
货号 |
普通PCR |
10102ES03 |
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快速PCR |
10157ES03 |
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52×高保真酶,30%-70%GC兼容 |
10153ES60 |
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52×高保真mix,30%-70%GC兼容 |
10154ES03 |
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83×高保真酶,30%-70%GC兼容 |
10148ES60 |
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83×高保真mix,30%-70%GC兼容 |
10149ES03 |
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5s/kb,超快速高保真mix,保真保快 |
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix |
10163ES03 |
2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye) |
10164ES03 |
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