——Protein A /G 琼脂糖或磁珠

 

 

产品介绍

Protein A、Protein G是最常应用于抗体亲和纯化和免疫沉淀的蛋白。 Protein A/G琼脂糖或磁珠将Protein A、G共价偶联到介质表面，具有结合能力更强、结合范围更广、实用性更高的特点。
 

	Protein A/G 4FF Agarose	Protein A/G MagBeads
基质	高度交联4%琼脂糖微球	聚合物磁性微球
填料粒径	45-165 µm	1 µm
载量	>20 mg 人IgG/mL	>50 µg 人IgG/mg
优势	简单易用，无需辅助设备	操作简单
	孔径大，结合力强	直径小，动力学好
	靶蛋白获取量高	表面光滑，beads吸附很少，背景低，抗体消耗少
缺点	多孔易吸附（需要做pre-clear)	配套磁力架使用方便

 

 

产品应用

 

1、纯化抗体：一步纯化即可从血清或腹水样品中分离出高纯度的抗体。

2、免疫沉淀（immunoprecipitation，IP）：通过对某蛋白质的富集，研究该蛋白的特性（如翻译后修饰等）。

 

3、免疫共沉淀Co-IP(co-Immunoprecipitation)：通过对某蛋白质的富集，研究与其结合的其他蛋白（即蛋白-蛋白相互作用、蛋白复合物等）。

 

 

 

操作流程

 

 

 

实用案例

1、Protein A/G 4FF Agarose纯化兔血清中的抗体。

 

图1 Protein A/G 4FF Agarose纯化抗体结果电泳图

 

2、Protein A/G 4FF Agarose用于COIP: 针对p65和细胞周期蛋白依赖性激酶9（CDK9）的特异性抗体对提取的总细胞蛋白进行免疫沉淀分析。

 

Fig 2. Immunoprecipitants were then subjected to western blot analysis using specific antibodies against CDK9 and p65.

 

 

常见问题

1、Co-IP背景较深或有杂带？

① 固相基质的非特异性结合，对琼脂糖微球做pre clear或者更换磁珠。

② 抗体结合非特异的蛋白，可设置对照排除非特异性条带。

③ 洗涤不当造成杂带，可优化缓冲液。
 

2、靶蛋白为什么没有条带？

① 没有添加抑制剂或裂解液不合适，导致蛋白构象改变不能结合或者降解。

② 饵蛋白较难洗脱，换成高强度的洗脱缓冲液。

③ 选用的抗体不合适，建议IP验证过的抗体，并优化下抗体用量。

④ 蛋白间为弱相互作用，或者相互作用依赖翻译后修饰。
 

3、Input条带清晰，Co-IP条带很弱？

① 饵蛋白X和靶蛋白Y的相互作用本身比较弱。

② 饵蛋白X并不是靶蛋白Y的唯一，只部分Y与X互作；可以尝试反向拉，比如用Y去拉X，可能效果比较好。
 

4、我的蛋白和抗体重链分子量很接近，怎样减少抗体干扰？

① IP/WB一抗使用不同种属来源，选择与IP抗体种属无交叉反应的二抗。

② 特殊二抗：比如仅识别重链或者轻链的二抗，或者仅识别天然抗体的二抗。

③ 直接源头遏制：将抗体交联到固相基质或protein A/G上，避免洗脱干扰。 
 

5、琼脂糖难离心，容易吸上来一点，怎么办？ 

① 使用带滤膜的离心柱，下部有接样管，琼脂糖完全截留在滤膜上 

② 换成磁珠
 

6、我的目的蛋白因为没有对应的特异性抗体而无法进行免疫沉淀，怎么办？

① 若此蛋白带标签，可选择针对此蛋白的标签抗体来进行免疫沉淀。

 

 

订购信息

 

产品名称	货号	规格（mL）	价格（元）
蛋白A/G琼脂糖纯化树脂	36403ES03/05/08/25/60	1/2/5/25/100	278/538/878/2886/7426
蛋白A/G琼脂糖快速纯化树脂	36404ES08/25/60	5 /25 /100	978/3186/8726
蛋白A/G免疫沉淀磁珠	36417ES03/08	1/5	787/2937

 

 

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蛋白L琼脂糖快速纯化树脂	36408ES08/25/60	5 /25 /100	2868/13288/27688
蛋白A纯化预装柱，1mL	36409ES03/08	1 mL/5×1 mL	528/2218
蛋白A纯化预装柱，5mL	36410ES08/25	5 mL/5×5 mL	1848/6838
蛋白G纯化预装柱，1mL	36413ES03/08	1 mL/5×1 mL	528/2218
蛋白G纯化预装柱，5mL	36414ES08/25	5 mL/5×5 mL	1848/6838
蛋白L纯化预装柱，1mL	36415ES03/08	1 mL/5×1 mL	938/3748
蛋白L纯化预装柱，5mL	36416ES08/25	5 mL/5×5 mL	3528/14088

文献引用
 

[1] Wang X , Yu C , Wang C , et al. Novel cyclin-dependent kinase 9 (CDK9) inhibitor with suppression of cancer stemness activity against non-small-cell lung cancer[J]. European Journal of Medicinal Chemistry, 2019, 181.  IF: 5.201

[2] Zheng L, Xiang C, Li X, et al. STARD13-correlated ceRNA network-directed inhibition on YAP/TAZ activity suppresses stemness of breast cancer via co-regulating Hippo and Rho-GTPase/F-actin signaling[J]. Journal of hematology & oncology, 2018, 11(1): 72.        IF：7.33

[3] Gao L, Guo Q, Li X, et al. MiR-873/PD-L1 axis regulates the stemness of breast cancer cells[J]. EBioMedicine, 2019, 41: 395-407.     IF：6.68