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新品上市 │ RPA核酸等温扩增核心酶原料重磅上市！等温扩增新宠

重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）是Piepenburg等人在2006年利用参与细胞DNA合成的蛋白重组和修复开发出的一种新的核酸等温扩增技术。该技术可以在37~42 ℃条件下实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测，可广泛应用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域[1]。

 

 
 

RPA技术原理

RPA技术主要依赖于能结合寡核苷酸引物的T4噬菌体来源的重组酶T4 UvsX、单链结合蛋白gp32和链置换Bsu DNA 聚合酶以及两条特异性的上下游引物实现扩增，具体扩增原理如图1所示：

 

  1. 重组酶引物复合体的形成：重组酶T4 UvsX在ATP的参与和定位因子（T4 UvsY）的帮助下与扩增引物结合形成重组酶引物复合体，并在双链DNA中寻找同源序列；

  2. 重组酶引物复合体定位至同源序列：重组酶引物复合体一旦定位到同源序列，则会插入双链DNA形成D-环结构，启动链置换反应，单链结合蛋白gp32会与解开的DNA链结合防止进一步被置换。

  3. 链置换扩增启动：重组酶T4 UvsX从重组酶引物复合体中被水解，3'端引物暴露并与Bsu DNA聚合酶结合，DNA开始复制延伸，最终两条母链分离，形成两条新的互补双链DNA。该反应在37-42℃下进行，可在30 min内实现目标序列1012倍的扩增。

 
图1.重组酶聚合酶扩增RPA技术扩增原理图[2]
 

 

 

RPA技术优势

  • 快速检测：10~30 min内（通常）将核酸样本扩增至可检测的水平。

  • 检测灵敏度高：可将痕量的核酸模板（低至单拷贝）扩增至可以检出的水平，且通常无需进行核酸纯化。

  • 无需昂贵的配套仪器设备：37~42°C恒温反应，无须热循环，摆脱仪器束缚，方便快捷。

 

 

RPA技术应用

RPA技术可用于不同种类的目标生物检测，如细菌、真菌、病毒、原生动物等的双链DNA、单链DNA、甲基化DNA以及通过RNA或miRNA反转录产生的cDNA等核酸样本。RPA目前有很多的应用，覆盖了农业、医学、食品、疫病防控等领域。
 
 
 

翌圣重组酶聚合酶扩增RPA技术核心酶原料

针对RPA技术，翌圣可提供自主研发的高品质核心酶原料，具备纯度高、残留控制严格、单次产能高可确保批间稳定性的产品优势，主要包括链置换Bsu DNA polymerase、T4 UvsX Recombinase、T4 UvsY protein、T4 gene 32 protein及肌酸激酶Creatine Kinase。

 

01

产品与选择

 

货号

主要功能

产品名称

11078ES

具有链置换活性的DNA恒温扩增聚合酶

Bsu DNA polymerase

(Large fragment, 5 U/μL)

11079ES

具有配对和链转移活性的重组酶

T4 UvsX Recombinase(2 μg/μL)

11080ES

辅助因子，促进重组酶与单链DNA的结合

T4 UvsY protein (2 μg/μL)

11081ES

ssDNA结合蛋白，稳定瞬时形成的ssDNA区域

T4 gene 32 protein (gp 32)

T4噬菌体基因32编码蛋白

14502ES

刺激ATP和肌酸分解为磷酸肌酸和ADP，释放能量

肌酸激酶Creatine Kinase (2 μg/μL)

 

02

客户测试案例展示

客户采用翌圣Bsu DNA polymerase (Large fragment, 5 U/μL)、T4 UvsX Recombinase (2 μg/μL)、T4 UvsY protein (2 μg/μL)、T4 gene 32 protein (gp 32)、肌酸激酶Creatine Kinase (2 μg/μL) 进行RPA扩增反应，得到正确的目的条带，且条带清晰、明亮，结果表明，翌圣重组酶聚合酶扩增核心酶原料可实现高效RPA等温扩增。
 
图2.客户测试翌圣重组酶聚合酶核心酶原料扩增结果图
注：2、4为阳性实验组；1、3为阴性对照组
 

 

翌圣等温扩增相关酶原料选择指南

产品定位

产品名称

产品货号

高灵敏度BSU酶

Bsu DNA polymerase (Large fragment, 5 U/μL)

11078ES

适合RPA的T4 UvsX重组酶

T4 UvsX Recombinase(2 μg/μL)

11079ES

T4 UvsX重组酶辅助因子

T4 UvsY protein (2 μg/μL)

11080ES

单链结合蛋白

T4 gene 32 protein (gp 32) T4噬菌体基因32编码蛋白

11081ES

肌酸激酶

肌酸激酶Creatine Kinase (2 μg/μL)

14502ES

高灵敏度Bst酶

Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)

14402ES

适合RT-Lamp的逆转录酶

Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase 第三代耐热逆转录酶

11111ES

第五代耐热逆转录酶Hifair® V Reverse Transcriptase(1000 U/μL)

14603ES

Hifair® III Reverse Transcriptase,600U/μL,Glycerol-free 第三代酶(无甘油版)

11297ES

鼠源RNase抑制剂

Murine RNase Inhibitor(40 U/µL) 鼠源RNase抑制剂

10603ES

 

鼠源RNase抑制剂 Murine RNase Inhibitor(200 U/µL)

10610ES

 

鼠源RNase抑制剂 Murine RNase Inhibitor(300 U/µL)

14671ES

 

Murine RNase Inhibitor(200 U/µL,Glycerol-free)

10703ES

防污染UDG酶

Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL

14455ES

染料法RT-Lamp显示试剂盒

RT-LAMP Dye Assay Kit(UDG plus)

13762ES

ph敏感染料法

RT-Lamp显示试剂盒（可冻干）

RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit

13906ES

高纯度dUTP

dUTP,100mM Solution 脱氧尿苷三磷酸溶液(100 mM)

10128ES

高纯度dNTP Mix

dNTP Mix(10 mM each)

10124ES

高灵敏荧光染料

EveGreen(20× in water) EveGreen(20×水溶液),同EvaGreen

10223ES

400-6111-883