随着国家发改委《“十四五”生物经济发展规划》的发布,让生物技术赛道更加的火热。高通量测序技术作为生物技术中的高精尖技术,在生殖遗传、产前筛查、肿瘤伴随诊断、肿瘤早筛、心血管疾病用药与筛查、病原微生物检测应用越来越广泛。
而文库构建环节作为高通量测序整个环节中的重要一环,对测序结果的质量起到决定性的作用,片段化酶酶切的效果、片段加A的能力、接头连接的效率、文库扩增的保真性,最终都决定了测序下机数据质量,影响了报告结果的准确性。正是因为肿瘤用药等应用在终端客户使用的普遍性,使得对产品的价格、报告周期、质量的要求越来越高。
翌圣可根据客户不同的应用场景,不同的技术平台,不同的样本类型,精准为客户提供建库方案。对于肿瘤伴随诊断服务提供商,翌圣可为所有illumina平台和MGI平台提供相应的建库产品。肿瘤伴随诊断实验所用到的样本类型种类繁多:新鲜的手术组织、穿刺活检组织,石蜡包埋固定的手术组织、穿刺活检组织,血液gDNA,血液游离DNA,胸腹水沉渣DNA,胸腹水游离DNA等样本类型。根据不同的样本类型,选择不同的建库方式。
一、 机械法文库制备方案
机械法建库试剂盒可针对经过超声波片段化的DNA,或者是血液游离DNA或者降解度较高的FFPE样本DNA来建库。翌圣Ultima Pro类全能型建库试剂盒(CAT#12197)可满足以上样本类型的建库需求,本产品采用高质量的酶学组成,在前一代建库试剂盒的基础上,改进了DNA片段末端修复和加A效率,同时改善了接头连接效率。本试剂盒采用新型的高保真酶,显著提高扩增均一性和保真性。本试剂盒模板投入量可兼容100 pg-1000 ng所有DNA样本。
较高的文库产出:
以2种不同的cfDNA样本为模板,投入量为5ng,扩增循环数12,比较文库产出以及测序数据基础质量。
与竞品试剂盒相比,12197测序数据表现均一,Duplicate较低、mapping rate较高,结构变异更少,Mismatch更少。
二、 酶切法文库制备方案
翌圣OnePot系列酶切建库试剂盒是新一代建库试剂盒(CAT#12205),与传统的机械建库法比较,酶切法建库摆脱了繁琐的超声过程,同时简化了操作流程。本品采用高质量的片段化酶,将片段化模块与末端修复模块合二为一,极大的降低了建库的时间和成本。本试剂盒具有优秀的文库转化率,可应用于肿瘤伴随诊断的FFPE样本、gDNA样本等各种样本类型500pg-1ug起始模板投入量的酶切建库。同时,翌圣可为客户专业定制匹配自动化建库流程的建库试剂,提供全套解决方案,让高通量测序技术在基因检测上不再难!
产品优势:
试剂盒性能展示:
1. 高效稳定的片段化效果
●以Human Blood gDNA为模板,以不同的投入量(20ng~1μg)使用12205酶切12min,酶切产物纯化,进行2100质控。结果如下图所示:
● 用人gDNA NA12878样本,Input DNA: 200 ng,酶切时间:8/10/12/14/16 min,用Agilent 2100质检
结果如下图所示:
综上结果:片段化酶的酶切效果不会受模板投入量的影响,只与酶切时间相关。
2. 酶切偏好性更低
从上图中可以看出,与竞品相比,翌圣片段化酶的片段偏好性与竞品一致。
3. 超高的文库扩增保真性
从Lambda DNA全基因组建库测序分析,结果显示:Canace Pro保真性显著优于竞品的结果
Sample | Mismatch(N/10000) | Insertion (N/1000000) | Deletion (N/1000000) |
Canace pro | 0.7807 | 0.6210 | 4.1144 |
K* | 1.6132 | 1.3446 | 9.3257 |
V* | 2.6568 | 1.9719 | 11.3092 |
产品订购
产品分类 | 产品名称 | 产品货号 | 产品规格 |
机械法建库试剂盒 | 12197ES08/24/96 | 8/24/96T | |
12199ES08/24/96 | 8/24/96T | ||
13310ES08/16/96/98 | 8/16/96/192T | ||
Hieff NGS® Ultima DNA Library Prep Kit for MGI® | 13311ES16/96 | 16/96T | |
酶切法建库试剂盒 | 12204ES08/24/96 | 8/24/96T | |
12205ES08/24/96 | 8/24/96T | ||
13321ES08/16/96 | 8/16/96T | ||
13322ES16/96 | 16/96T | ||
末修加A模块 | 12605ES24/96/98 | 24/96/1000T | |
12608ES24/96 | 24/96T | ||
片段化/末修/加A模块 | 12609ES24/96/98 | 24/96/1000T | |
12619ES24/96 | 24/96T | ||
连接模块 | Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module for kit | 12804ES24/96 | 24/96T |
12805ES24/96/98 | 24/96/1000T | ||
扩增模块 | 2×Super Canace® II Uracil High-Fidelity Mix for Library Amplification | 12620ES24/96/97 | 24/96/400T |
12624ES24/96 | 24/96T | ||
片段化酶 | 12907ES08/24/96 | 8/24/96T | |
末修单酶 | 12901ES60/76/90 | 100/500/2000U | |
12902ES76/86/92 | 500/2500/10000U | ||
A尾添加 | Hieff NGS® S-Taq DNA Polymerase for dA-Tailing | 13486ES24/96/98 | 24/96/1000T |