------支原体检测、预防、去除，一步到位！
支原体
支原体（Mycoplasma）又称霉形体，是目前发现的最小、最简单的原核生物，直径大小0.1~0.3μm，能通过滤膜且呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分支状等多种形态。实验室和生物制品工厂在细胞培养过程中易受到支原体污染，据文献报道：支原体污染在储存细胞系中发生率约为 15%-35%，在生物制药行业中约为0.44%-6.70% [1]。
图1：支原体的形态
支原体污染的影响
细菌和真菌污染相对较容易检测、预防和去除，但支原体造成的污染却很难察觉，即使生长密度高达 107-109CFU/ml，也很难有污染迹象（比如溶液浑浊、pH变化等）。支原体污染后能导致细胞产生多种变化（见图2）。
图2：受支原体污染后细胞出现的相关状态的改变
支原体污染解决方案——Yeasen三位一体帮您解决细胞支原体污染问题
翌圣生物（YEASEN）经过匠心开发并多次的实验验证，推出了清除支原体的试剂，包括：支原体检测系列、支原体清除（培养箱、水浴锅、超净台和细胞房）和支原体预防相关等。
图3：yeasen支原体污染整体解决方案
一步法恒温支原体检测：
Yeasen一步法恒温支原体检测试剂采用等温扩增技术，无需特殊仪器，1h就可以通过颜色判定检测结果。检测灵敏度是普通恒温检测的1000倍并添加了防污染组分，杜绝假阳性现象的发生。
图4：一步法支原体检测操作流程
PCR法支原体检测：
Yeasen巢式PCR支原体检测不同于普通的PCR检测方法，将原有的1对引物提高至3对引物，针对支原体16s和23s保守区进行巢式PCR扩增，实现了准确度和灵敏度的双重突破。
图5: PCR法扩增含不同浓度支原体样品获得的凝胶电泳图
qPCR法支原体检测：
Yeasen的qPCR支原体检测试剂盒（探针法）是基于EP药典推荐NAT法推出超简便快捷检测方法，克服了普通PCR灵敏度低和培养法耗时久的问题，将结果精准度和使用便捷度有了质的提升！3h内可快速、简便检测支原体存无，优于培养法的28天耗时检测过程。
图6: qPCR法测试流程
产品数据
灵敏度和扩增效率测试
10 CFU/mL口腔支原体标准品检出结果
10 CFU/mL肺炎支原体标准品检出结果
10 CFU/mL猪鼻支原体标准品检出结果
10 CFU/mL精氨酸支原体标准品检出结果
试剂盒扩增效率：101-108 copies/uL
扩增效率≥96%，标准曲线R2≥0.996
不同检测方法对比
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产品名称 |
所需设备 |
检测支原体种类 |
所需时间 |
检测灵敏度 |
结果观察 |
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LAMP等温扩增法 |
PCR仪或水浴锅 |
27种 |
1h |
103 |
肉眼观察 |
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巢式PCR法 |
PCR仪和电泳仪 |
13种 |
3h |
10个拷贝 |
凝胶观察 |
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qPCR法 |
PCR仪和定量PCR仪 |
105种 |
3h |
单拷贝 |
Ct值判定 |
翌圣MycAwayTM 支原体去除试剂（1000×）是一种混合制剂，可通过抑制支原体生长所必须的相关蛋白合成来达到支原体清除效果且对细胞无伤害，最大程度上挽救您的细胞，减少因支原体污染带来的损失。
图6：细胞去除效果的展示
支原体去除试剂的特点：
毒性低：对细胞毒性小，不影响后续细胞实验，如细胞活力检测和细胞转染等；
稳定性强：-20℃试剂能较长时间保存并保持高效能；
操作简单：只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可；
起效快：“立竿见影”、最快3天即可见效；
去除范围广：能去除实验室绝大多数支原体类型。
图7：支原体去除试剂细胞毒性检测图示
提前做好支原体预防工作是降低支原体感染几率的最有效的方法，yeasen开发的支原体预防系列产品，具有操作简单、方便、稳定性好等特点。
TIPS
1）源头预防
对于新引进或者原代分离的细胞，需要进行支原体检测，检测结果为阴性才可进入无菌室培养
2）实验操作流程规范
穿戴细胞房专用实验服并及时处理废弃物
3）污染物的处理
一旦发现已经污染支原体的细胞，灭活后弃之并更换新的细胞，避免支原体大规模散播。
4）无菌室的维护
无菌室应每周做一次消毒，用0.1%新洁尔灭擦拭操作台及可能污染的死角，开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌半小时。每月做一次全面清洁工作，先用去污染剂洗刷地面，再用含1%新洁尔灭的清水清洗地面，最后再灭菌30min。
文献引用
[1] Fratz-Berilla EJ, Angart P, Graham RJ, et al. Impacts on product quality attributes of monoclonal antibodies produced in CHO cell bioreactor cultures during intentional mycoplasma coNATmination events. Biotechnol Bioeng. 2020;117(9):2802-2815.
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类别 |
产品 |
货号 |
规格 |
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检测 |
40612ES25/60 |
25/100 T |
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40618ES25/60 |
25/100 T |
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40601ES10/20 |
10/20 assays |
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去除 |
40605ES02/03 |
1/2×500 mL |
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40607ES03/08 |
1/5×1 mL |
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预防 |
40608ES03/08 |
1/5×1 mL |
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|
40609ES60 |
100 mL |
||
|
40610ES60 |
100 mL |
