全示踪/半示踪qPCR Mix原理和区别

2026-06-30

一、为什么要示踪？

实时荧光定量PCR（qPCR）是分子生物学最核心的定量工具之一。然而在日常实验中，96孔乃至384孔板的操作一直是痛点：

漏加样：孔数多、布局复杂，某孔忘记加模板或Mix而不自知；
错加样：同一样品加两遍，另一个样品却空着；
标识困难：透明PCR板/管在白色光下难以看清液滴。

示踪染料的出现，正是为了解决这些"看不见"的问题。通过在预混液中加入惰性可见染料，让操作者能用肉眼判断加样进程，大幅降低失误率。但同样是"示踪"，不同产品的技术深度却大有不同。

二、示踪染料的分类与原理

根据示踪机制的深度，可以将市面上的qPCR示踪产品分为两大类：半示踪（单一染料示踪）和全示踪（变色反应示踪）。

2.1 半示踪 qPCR Mix（单一染料示踪）

参数	说明
着色原理	在预混液中加入一种惰性水溶性染料（如蓝色食用色素/亮蓝），使混合液呈蓝色或蓝绿色
染料类型	非荧光可见染料（如 Brilliant Blue FCF / FD&C Blue No.1），不影响 SYBR Green I 的荧光信号采集
作用方式	预混液为蓝色，加样时可以看到蓝色液滴进入孔中
加样后变化	颜色保持不变 — 不论是否加入模板，颜色均为蓝色，无法区分已加样孔和未加样孔
技术定位	基础级示踪 — 解决"能看到液滴"的问题
代表产品	翌圣 Hieff UNICON® Universal Blue (11184ES)、Advanced qPCR SYBR Master Mix (11185ES)

半示踪的核心价值：

在白色背景板或透明管中，预混液本身的蓝色能让操作者确认枪头确实有液体、试剂液体确实加进了孔。

2.2 全示踪 qPCR Mix（变色反应示踪 — ColorGPS™）

参数	说明
技术名称	ColorGPS™（Color Guided Pipetting System）
着色原理	预混液中含有复合染料体系，包括一种或多种活性/惰性染料，与模板/稀释液混合后发生变色反应
染料系统	复合染料体系：（1）pH指示剂类染料（如酚红/溴百里酚蓝类似物），对模板/Dilution Buffer的pH/离子环境敏感；（2）黄色稀释液中的染料（11188-B组分呈黄色），与预混液混合后发生颜色叠加/中和反应
变色逻辑	预混液（2×）呈紫粉/蓝紫色 → 加入模板/cDNA/稀释液后 → 体系微环境改变或染料交互 → 变为蓝绿色/绿色
加样后变化	颜色发生明显变化 — 已加样孔与未加样孔呈现不同的颜色，孔与孔之间可以清晰区分
技术定位	进阶级示踪 — 解决"哪些孔加过了哪些还没加"的问题
代表产品	翌圣 Hieff UNICON® ColorGPS™ (No Rox 11188ES、Low Rox 11189ES、High Rox 11190ES)

ColorGPS™ 的核心价值：

真正实现"移液追踪"（Pipetting Tracking）。建板时，先点一排 Mix（蓝色），再逐一加模板（变为蓝绿色）。走到下一排回头一扫，蓝色孔是未加样、蓝绿色孔是已加样，一眼识别漏加/错加，大大提高建板效率和准确性。

三、示踪染料系统深度对比

对比维度	半示踪（传统蓝染）	全示踪（ColorGPS™）
染料数量	单一染料	复合染料体系（多组分）
染料类型	水溶性非荧光蓝色染料（亮蓝类色素）	混合指示剂染料（pH敏感型 + 反应型）
预混液颜色	蓝色/蓝绿色	蓝色
加样后颜色	蓝色（不变）	绿色（变色）
变色触发条件	无	模板/Dilution Buffer混合后微环境pH/离子强度改变
是否影响qPCR信号	不影响（非荧光染料，吸收光谱远离SYBR/ROX）	不影响（变色过程不影响 SYBR Green I 荧光通道）
肉眼辨别已加孔	❌ 无法分辨	✅ 颜色差异一目了然
96孔板建板效率	需逐孔记录或标记	颜色追踪，无需额外标记
产品组成	单一预混液	2× Master Mix + 10× Dilution Buffer 例如（11188-B，黄色稀释液）

ColorGPS™ 独特组分说明：

全示踪产品（11188/89/90ES）额外包含一瓶10× Dilution Buffer，该稀释液呈黄色，用于模板的预稀释。当黄色稀释模板与紫粉色预混液混合时，发生颜色叠加反应，变为蓝绿色。这一"显色变化"就是实现全示踪的关键技术所在。而半示踪产品只有单一预混液，不配备稀释液，因此不具备变色条件。

四、全示踪与半示踪产品性能对比

性能指标	11184ES Universal Blue （半示踪）	11188/89/90ES ColorGPS （全示踪）
示踪类型	蓝色预混液	ColorGPS™ 变色追踪
热启动方式	抗体法	抗体法
检测灵敏度	单拷贝基因可检测	单拷贝基因可检测
动态范围	7个数量级	7个数量级
线性区分度	可分辨2倍浓度差异	可分辨2倍浓度差异
GC适应范围	30-70%	30-70%
ROX类型	全平台通用（预混ROX，免调整）	分No/Low/High Rox三种，按仪器精确选择
室温放置稳定性	配制后4℃可放置24h	体系常温可放置24h
反复冻融稳定性	支持	支持（20次冻融不影响）
兼容快速程序	✅ 最快46min完成	✅ 标准/快速双兼容
通量支持	96孔 / 384孔	96孔 / 384孔

五、选型指南：什么时候选哪种？

5.1 选半示踪的场景

· 操作经验丰富，仅需确认"试剂液滴加到了孔中"；

· 建板量不大（半板/单排），操作从容；

· 预算优先，追求基础功能与性价比；

· 实验室使用全平台通用型产品（11184ES），不想区分ROX型号；

5.2 选全示踪（ColorGPS™）的场景

· 大批量建板（整板96孔/384孔），容易出现漏加/错加；

· 实验室新手/学生操作，需要可视化辅助；

· 同时进行多板加样，需要快速定位加样进度；

· 希望最大限度降低因加样误差导致的重复实验成本；

· 对qPCR结果重复性要求极高（如诊断/IVD研发）；

· 可选择合适的ROX型号获得最优信号校正效果。

六、翌圣推荐产品一览

以下为翌圣生物 ColorGPS™ 全示踪系列及半示踪系列核心产品清单：

全示踪系列 — Hieff UNICON® ColorGPS™

货号	产品名称	ROX类型	适用仪器	规格
11188ES	ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox)	无 ROX	Bio-Rad CFX系列、 Corbett Rotor-Gene、 Eppendorf	1 mL / 5×1 mL / 100×1 mL
11189ES	ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix(Low Rox)	Low ROX	ABI 7500、7500 Fast、 ViiA 7、QuantStudio 5/6/7	1 mL / 5×1 mL / 100×1 mL
11190ES	ColorGPS qPCR SYBR Green Master Mix(High Rox)	High ROX	ABI StepOne、StepOnePlus、 7900HT、QuantStudio 3	1 mL / 5×1 mL / 100×1 mL

半示踪系列

货号	产品名称	ROX类型	产品特色
11184ES	Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix	预混ROX 全平台通用	蓝色预混液示踪全仪器平台通用，无需调整ROX 最快46分钟完成实验单拷贝基因检测灵敏度
11185ES	Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix	预混ROX	荧光强度高、扩增产量高蓝色加样示踪均衡不同GC含量扩增