皮下成瘤│小鼠肝癌（Hepa1-6细胞系）皮下荷瘤模型构建案例

实验所用产品

产品名称	产品货号
Ceturegel®Matrix LDEV-Free基质胶	40183ES

 

一、细胞准备与悬液制备

细胞培养：使用处于对数生长期的小鼠肝癌细胞系Hepa1-6。

细胞消化与收集：使用含0.25% EDTA的胰酶消化细胞，用含血清培养基中和后离心收集。

清洗与重悬：细胞沉淀用预冷的PBS清洗两次，离心弃上清。进行精确细胞计数后，用预冷的PBS将细胞重悬并调整浓度为 3×10⁷个细胞/mL。悬液置于冰上备用。

二、细胞-基质胶混合物的制备

低温操作：全过程在冰上操作。

试剂准备：提前将分装储存于-20℃的基质胶转移至4℃冰箱过夜融化。

等比例混合：在预冷的离心管中，取 100 µL 融化并预冷的基质胶与等体积（100 µL）的上述细胞悬液（浓度为3×10⁷个细胞/mL）轻轻混匀，避免产生气泡。

保持低温待用：混合完成后，将混合物置于冰上。立即用预冷的注射器吸取全部 200 µL 混合液准备接种，以尽量减少基质胶凝固。

三、C57BL/6小鼠皮下接种操作

动物准备：抓取C57BL/6小鼠，用剃毛器或脱毛膏去除其左侧腋下区域的毛发，并用75%酒精棉球消毒皮肤。

皮下注射：

使用已吸取混合液的注射器（通常使用1 mL注射器配合适当针头）。

左手固定小鼠，使其左侧皮肤舒展。针头以较小角度（约10-30度）刺入消毒区域皮下，平行于体表推进一小段距离形成皮下隧道。

缓慢、稳定地将全部 200 µL 细胞-基质胶混合液注入皮下，可见形成一圆形皮丘。

注射后等待数秒，缓慢拔出针头，并用干棉球轻压针孔片刻，防止液体渗出。

术后观察：将小鼠放回笼内，观察其短期状态是否正常。

四、实验结果

注射后四天，可以看见明显的米粒大小的肿瘤硬块，下图为注射后第9天的肿瘤体积大小。未用基质胶的肿瘤体积最小，使用翌圣基质胶的小鼠肿瘤体积最大。

图1未用基质胶，肿瘤体积约为185.5mm³；图2使用其他品牌的基质胶，肿瘤体积约为188.7mm³；图3使用翌圣基质胶，肿瘤体积约为：0.5×7.7×10.45×7.7=309.8mm³

  

（数据来源：浙江理工大学）

 

皮下成瘤实验小贴士

细胞状态优先：确保使用处于对数生长期、活性高（>95%）的细胞。接种前进行准确的细胞计数，并尽量缩短细胞在冰上或悬液状态下的等待时间，以维持最佳活力。

严格低温操作：基质胶在4℃以上会迅速聚合。所有涉及基质胶的步骤（液化、分装、混合）务必在冰上完成，注射器也应预冷，这是防止混合物在针头内凝固、保证注射顺畅的关键。

注射技巧：进行皮下注射时，针头刺入皮肤后应平行于体表推进一小段，形成“隧道”后再缓慢推液。注射后可轻压针孔片刻，能有效防止细胞悬液渗出，确保接种量的准确。

规范监测：待肿瘤可触及后，建议由同一操作者定期、轻柔地使用游标卡尺测量。记录肿瘤的最长径和与之垂直的最短径，并采用统一公式计算体积，以减少人为误差，获得可靠的生长曲线。