DNA片段大小风险等级划分

注：风险程度依据风险等级递增

目前，检测宿主细胞残留DNA含量的方法都相对成熟，而且药典法规也有明确规定，如《中华人民共和国药典》2020年版第三部规定，外源性DNA残留检测采用DNA探针杂交法、荧光染料色法和定量PCR法

然而，关于残留DNA片段大小的检测与分析，目前还没有特定推荐的方法。

目前，行业内对于残留宿主细胞DNA片段分析，主要是利用毛细管电泳的方法。研究者们开发了一种基于毛细管凝胶电泳与敏感激光诱导荧光（CGE-LIF）检测残留DNA分子大小的方法，可以检测生物制品中残留DNA的大小，实验表明，大多数宿主细胞残留DNA片段大小为50-2000bp。除了毛细管电泳法外，实时荧光定量PCR（qPCR）法也被用于进行生物制品中生产用细胞相关的DNA片段分布的分析。且qPCR法相比于CGE-LIF操作更简单，耗时更短。

针对上述情况，翌圣生物自主研发了HEK293残留DNA片段分析试剂盒，采用荧光探针qPCR法原理，设计了四种不同的扩增片段（82bp、133bp、227bp、515bp），用于定量检测样本中HEK293宿主细胞残留DNA片段的大小分布情况。样本类型包括：慢病毒上清液、腺相关病毒AAV上清液、HEK293细胞裂解液等。还研发了与之配套使用的宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒，以及配套的自动化核酸提取仪器。