——Yeasen TUNEL detection Kit 让“美”原位呈现

通过TdT转移酶将Fluorescein-dUTP结合到有缺口的DNA上是检测细胞凋亡的常用方法之一，如Roche提供的In Situ Cell Death Kit正是基于这个原理。产品中的TdT转移酶活性直接影响到标记的效率。翌圣生物立足于酶制剂生产，力求开发以酶制剂为基础的较高具性价比产品，推出三款荧光素（Alexa Fluor 640，Alexa Fluor 488，FITC）标记的Tunel检测试剂，在满足客户对产品高品质要求的同时又可以享受低至Roche一半的价格。

目前已经有超过120个课题组正在使用该产品，并在权威杂志上发表多篇英文文章，如Theranostics和EMBO Molecular Medicine等。

检测机理：

细胞凋亡晚期，染色体DNA双链断裂或单链断裂产生大量的粘性3-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移（TdT）的作用下，将荧光素/酶标记的dUTP结合到DNA的3-末端，从而可通过检测荧光完成对细胞凋亡的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（Terminal-Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Nick End Labeling,TUNEL），原理见图1。

图1：脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）原理图

产品特点:

适用范围广：可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞。

检测灵敏度高：可检测出极少量的凋亡细胞。

背景干扰小：信噪比高。

观察多样性：荧光显微镜观察，流式检测。

数据展示：

1、小鼠前脂肪细胞（3T3-L）Tunel检测

图2：小鼠前脂肪细胞3T3-L凋亡检测。第一行代表阴性对照，第二行代表阳性对照。

检测试剂：Cat No. 40306 TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)

2、石蜡切片样本的Tunel检测

图3：在皮下移植瘤模型中，单独使用LY3009120或联合使用Vemurafenib和Obatoclax可以有效延缓甲状腺癌。IF=8.8

样本类型：石蜡包埋的肿瘤组织（取自裸鼠）。检测试剂：Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488)。

3、细胞爬片的Tunel检测

图4：硫酸锌对不同分组的内皮细胞凋亡的影响 

样本类型：HUVEC（人脐静脉内皮细胞）。检测试剂：Cat No. 40308 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 640)

4、流式细胞术检测细胞凋亡

图5：PA处理可以有效降低重编程（reprogramming）过程中凋亡的发生。IF=3.7

样本类型：iPS Cells。检测试剂：Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488)。

文献引用：

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常见问题：

Q:出现非特异性荧光标记？

1）组织/细胞本身核酶或聚合酶活性水平较高，易导致出现非特异性的荧光标记，例如平滑肌细胞。解决方法是，取细胞或组织后立即固定并且要充分固定，以阻止这些酶导致假阳性。
2）使用了不适当的固定液，例如一些酸性固定液，导致出现假阳性。建议采用新鲜配置的4%中性对聚甲醛固定液。
3）TUNEL检测反应时间过长，细胞或组织表面不能保持湿润，也可能出现非特异性荧光。注意控制反应时间，并确保TUNEL检测反应液能很好地覆盖样品。
 

Q:荧光背景很高？

1）高速分裂和增殖的细胞，转录水平高，有时也会出现细胞核中的DNA断裂。
2）在激发光下长时间的暴露，导致假阳性的出现。

Q:标记效率低？

1）使用乙醇或甲醇固定会导致标记的效率较低。

2）固定时间过长，导致交联程度过高。此时宜减少固定时间。
3）组织切片过厚，使得固定效果不理想，最好控制在10 μm以内。

4）荧光淬灭。Fluorescence在普通光照10min就会严重淬灭。解决方法是需注意避光操作。

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