产品描述
 

本产品适用于多重PCR实验。Hieff^® Multiplex PCR Kit以多重PCR酶制剂与2×扩增缓冲液为组分的试剂盒，可快速便捷地用于PCR反应，具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点，可以对20对及以上的引物特异、均一地进行扩增反应。

产品组分
 

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		13279ES60 (100 T)	13279ES76 (500 T)
13279-A	Hieff® Multiplex PCR Enzyme	100 μL	500 μL
13279-B	2×Hieff® Multiplex PCR Buffer	2×1.25 mL	10×1.25 mL

【注】:13279-A组分避免反复冻融。

运输与保存
 

冰袋运输。-20℃储存，有效期1年。

反应体系
 

组分	体积 (μL)	终浓度
2×Hieff® Multiplex PCR Buffer	25	1×
Hieff® Multiplex PCR Enzyme	1	-
Primer mix	x	0.1 μM-0.5 μM
模板DNA	DNA总量：1 ng-200 ng	-
无菌超纯水	up to 50	-

【注】 1）上表中DNA量和引物浓度均为推荐浓度，可根据具体实验情况进行调整最适浓度。

 2）每条引物的浓度可在0.1 μM-0.5 μM范围内进行调整。

 3）2×Hieff^® Multiplex PCR Buffer中已经包含扩增所需要的Mg²⁺、dNTP、盐离子等，无需额外添加。

扩增程序
 

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	94	1 min	1
变性	94	30 sec	15-45
退火	50-60	60 sec
延伸	72	60 sec/kb
终延伸	72	10 min	1

【注】 1）在PCR仪上设置上表中的反应程序进行多重PCR反应（设置热盖温度至105℃左右）

       2）使用本产品获得的扩增产物无需添加上样缓冲液，可直接上样用于电泳检测。

       3）延伸时间以最长扩增片段为准，可适当延长延伸时间，但要避免过长时间带来的非特异性扩增。

实验案例分享
 

以人基因组DNA为模板，使用10对引物进行多重PCR反应，分别扩增97 bp、139 bp、181 bp、212 bp、268 bp、331 bp、415 bp、507 bp、741 bp和1172 bp的目的片段。

反应体系配制
 

组分	体积 (μL)	终浓度
2×Hieff® Multiplex PCR Buffer	25	1×
Hieff® Multiplex PCR Enzyme	1	-
Primer mix	10	0.1 μM
模板DNA	1	2 ng/μL
无菌超纯水	up to 50	-

扩增程序
 

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	94	1 min	1
变性	94	30 sec	35
退火	60	60 sec
延伸	72	60 sec/kb
终延伸	72	10 min	1

电泳检测
 

2%琼脂糖凝胶；电压130 V；电泳时间30 min。

实验结果
 

M：100 bp DNA ladder
Lane1-2：10重PCR产物
 

HB200511