产品信息
 

产品名称	产品编号	规格	价格（元）
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free）	13278ES60	100 T	875.00
Hieff® Multiplex PCR Kit（Mg2+ free）	13278ES76	500 T	3165.00

产品描述
 

本产品适用于多重PCR实验。Hieff^® Multiplex PCR Kit（Mg²⁺ free）由多重PCR酶制剂与不含Mg²⁺的2×扩增缓冲液组成，在进行扩增反应时，可在反应体系中根据需求添加适量Mg²⁺。该产品的扩增具有高均一性、高特异性和高灵敏度的特点，可以对20对及以上引物体系进行特异、均一的扩增反应。

产品组分
 

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		13278ES60 (100T)	13278ES76 (500T)
13278-A	Hieff® Multiplex PCR Enzyme	100 μL	500 μL
13278-B	2×Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free)	2×1.25 mL	10×1.25 mL
13278-C	MgCl2 (25 mM)	1×600 μL	3×1 mL

【注】:13278-A组分避免反复冻融。

运输与保存方式
 

冰袋运输。-20℃储存，有效期1年。

反应体系
 

组分	体积 (μL)	终浓度
2×Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free)	25	1×
Hieff® Multiplex PCR Enzyme	1	-
Primer mix	x	0.1 μM-0.5 μM
模板DNA	DNA总量：1 ng-200 ng	-
MgCl2（25 mM）	y	1-5 mM
无菌超纯水	up to 50	-

【注】:
1）DNA量和引物浓度均为推荐起始投入量和浓度，可根据具体实验情况进行调整，选择最适投入量和浓度；
2）引物浓度：建议每条引物的浓度在0.1 μM-0.5 μM参考范围内进行调整；      
3）Hieff^® Multiplex PCR Buffer（Mg²⁺ free）中已经包含扩增所需要的dNTP、盐离子等，但不包含Mg²⁺，需在反应体系中根据实验需求添加适量Mg²⁺。

     

扩增程序
 

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	94	1 min	1
变性	94	30 sec	15-45
退火	50-60	60 sec
延伸	72	60 sec/kb
终延伸	72	10 min	1

【注】:
1）在PCR仪上设置上表中的反应程序进行多重PCR反应（设置热盖温度至105℃左右）

2）使用本产品获得的扩增产物需添加Loading buffer后用于电泳检测。

3）延伸时间以最长扩增片段为准，可适当延长延伸时间，但要避免过长时间带来的非特异性扩增。

实验案例分享
 

以人基因组DNA为模板，使用10对引物进行多重PCR反应，分别扩增97 bp、139 bp、181 bp、212 bp、268 bp、331 bp、415 bp、507 bp、741 bp和1172 bp的目的片段。

扩增体系配制			扩增程序设置
组分	体积	终浓度		循环步骤	温度	时间	循环数
Hieff® Multiplex PCR Buffer (Mg2+ free)	25 μL	1×		预变性	94℃	1 min	1
Hieff® Multiplex PCR Enzyme	1 μL	-		变性	94℃	30 sec	35
Primer mix	10 μL	0.1 μM-0.5 μM		退火	60℃	60 sec
模板DNA（100 ng/μL）	1 μL	2 ng/μL		延伸	72℃	60 sec
MgCl2（25 mM）	5 μL	2.5 mM		终延伸	72℃	10 min	1
无菌超纯水	to 50 μL	-

电泳检测
 

2%琼脂糖凝胶；130 V；电泳时间1 h。

实验结果
 

Lane 1：100bp DNA marker
Lane 2-3：10重PCR产物

 

 

 

HB200512