产品简介

 

重组肠激酶（rEK）是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段，氨基酸序列与牛肠激酶轻链一致，有着和天然提取的肠激酶同样特异的酶切位点，切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，同时重组肠激酶（rEK）具有比天然酶更高的切割活性。

翌圣重组肠激酶为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶，不含其他蛋白酶，可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白，并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签，由于具有极高酶切活性，酶切反应使用量少，不影响下游蛋白应用，可不考虑除去。

 

产品信息

 

货号	20401ES60 / 20401ES70 / 20401ES76 / 20401ES80 / 20401ES90
规格	100 U / 200 U / 500 U / 1000 U / 5000 U

 

产品性质

 

来源（Source）	大肠杆菌表达
分子量（Molecular Weight）	理论值25.85 kDa
外观（Appearance）	澄清、无色至淡黄色液体
酶浓度（Enzyme Concentration）	≥5 U/uL
活性定义（Activity Definition）	一个活性单位定义为25°C，12-16 h，在25 mM Tris-HCl，Ph 8.0缓冲体系下，将500 μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量
内毒素检测（Endotoxin）	用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg
质量保证（Quality assurance）	经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；不含其他蛋白酶，无非特异性切割
缓冲体系（Buffer）	50 mM Tris-HCl，pH8.0，250 mM NaCl，2 mM Ca 2+，50%甘油

 

储存条件

 

-25~-15℃保存，有效期2年。尽量避免反复冻融（5次以内，无活性损失）

 

使用方法（应用举例）

【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同，建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。

1）反应体系

融合蛋白	0.05-0.1 mg（蛋白浓度：0.1-1 mg/mL）
Enterokinase	0.1-0.2 U
缓冲体系	25 mM Tris-HCL 8.0

2）反应条件：25°C过夜酶切（注：完全酶切需要16-24 h）。

【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1 U的溶液使用。

4°C低温酶切条件：4°C能对底物进行有效酶切，但需要延长酶切时间至48-64 h 或者增加2-3倍酶量。

 

注意事项

 

1. 本产品所讲述的缓冲体系需要自行配置。
2. 不建议37℃条件下酶切，可能会有非特异性酶切出现。
3. 在＞200 mM咪唑，或＞200 mM NaCl，或＞5%甘油，酶切会受到影响。如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种，为获得理想的酶切结果，请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中，然后再进行酶切实验；若不方便透析，可将样品稀释到咪唑含量在100 mM以下，NaCl浓度在50 mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白比例不变；若干扰因素很多，且不便去除，需要适当增加酶量或延长酶切时间，有助于得到理想的酶切效果。
4.  磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用，痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性，因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
5.  本品是具有高酶活力重组肠激酶，切割蛋白使用量少，可不考虑除去。后续如需去除重组肠激酶，可用阴离子交换树脂（如DEAE-FF）对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下：

         平衡缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0

         洗脱缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
     6. 蛋白酶切效果不好，可适当增加酶量，或适当延长酶切时间。

     7. 本产品仅作科研用途。

     8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

Ver.CN20231101