Tth DNA Polymerase是一种从嗜热菌Thermus thermophilus HB8中发现的耐热DNA聚合酶。在Mg²⁺存在的条件下，该酶具有5′-3′ DNA聚合酶活性和5′-3′ 核酸外切酶活性，无3′-5′ 核酸外切酶活性，可广泛用于PCR扩增反应。在Mn²⁺存在的条件下，该酶在55-70℃条件下表现出较强的逆转录活性，可用于一步法RT-PCR反应。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		14607ES72 (250 U)	14607ES80 (1250 U)
14607-A	Tth DNA Polymerase (5 U/μL)	50 μL	250 μL
14607-B	5×Tth RT-PCR Buffer	1 mL	4×1.25 mL
14607-C	10×Tth PCR Buffer (with Mg2+)	500 μL	2×1.25 mL
14607-D	50mM Mg(OAc)2	250 μL	1.25 mL
14607-E	dNTP Mixture (10 mM each)	150 μL	750 μL

 

运输与保存方法

干冰运输。-20℃以下储存，有效期2年。

 

单位定义

用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在 74℃，30 分钟内，摄入 10 nmol 的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为 1 个活性单位（U）。

 

注意事项

1）Buffer 在融解时，如果出现少量沉淀属正常现象，请颠倒混匀后使用。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

 

使用方法

推荐PCR反应操作流程：

1、反应体系配制

组分	体积（μL）
10×Tth PCR Buffer (with Mg2+)	5
Tth DNA Polymerase (5 U/μL)	0.5
dNTP Mixture (10 mM each)	1
上游 Primer 10μM	2
下游 Primer 10μM	2
Template DNA	50 pg- 1μg
ddH2O	to 50

【注】：可根据具体实验调整Tth DNA Polymerase、上下游引物和的dNTP Mixture用量。

2、PCR反应程序

循环步骤	温度（ºC）	时间	循环数
预变性	94	30 sec-5 min	1
变性	94	30 sec
退火	50-70	30 sec	35
延伸	72	60 sec/kb
终延伸	72	10 min	1

【注】：可根据具体实验调整反应条件。

推荐RT-PCR反应操作流程：

1、反应体系配制

组分	体积（μL）
5×Tth RT-PCR Buffer	10
Tth DNA Polymerase (5 U/μL)	1.5
50mM Mg(OAc)2	2.5
dNTP Mixture (10 mM each)	1.5
上游 Primer 10μM	2
下游 Primer 10μM	2
Template RNA	50 pg- 1μg
ddH2O	to 50

【注】：可根据具体实验调整Tth DNA Polymerase、上下游引物和的dNTP Mixture用量。

2、RT-PCR反应程序

循环步骤	温度（ºC）	时间	循环数
逆转录	55-70	30 min	1
预变性	94	30 sec-5 min	1
变性	94	30 sec
退火	50-70	30 sec	35
延伸	72	60 sec/kb
终延伸	72	10 min	1

【注】：可根据具体实验调整反应条件。

HB221123