UniPhi29 DNA Polymerase来源于 Bacillus subtilis 噬菌体，是通过对野生型 phi29 DNA 聚合酶进行基因工程改造获得的突变体。与野生型 phi29 DNA 聚合酶相比，该酶可在 42°C 条件下持续进行 DNA 合成，这一高温反应特性显著提升了实验表现。此外，UniPhi29 DNA Polymerase 保留了强效的 3'→5' 外切酶校读活性，合成 DNA 片段的保真性高。由于该酶的外切酶活性较强，在合成过程中，引物需进行 3' 末端硫代修饰，以降低外切活性对引物的切割效应。

1) 提升复杂模板的扩增能力：增强了对高 GC 含量、回文结构等复杂模板的延伸能力，使 NGS 测序覆盖度更加均一，降低所需测序深度，同时减少测序中的 Gap 区域，提高单细胞测序的数据质量与完整度。

2) 提高扩增产物产量与效率：在全基因组扩增（WGA）、多重置换扩增（MDA）及滚环扩增（RCA）等实验中，高温反应条件（42℃）显著提高了扩增产物产量及扩增效率。

3) 降低非特异性扩增：高温反应条件（42℃）有效减少了非特异性扩增产物的生成，提升了反应特异性。

1.灵敏度高，fg 级微量环状模板稳定检出

图1. RCA灵敏度测试结果

实验条件：20 μL 标准 RCA 体系，10 U UniPhi29 DNA Polymerase，随机引物10μM，dNTP 0.5mM，42℃恒温孵育 2 h；模板梯度 1 ng~1 fg 环状质粒。

实验结论：UniPhi29 DNA Polymerase 可稳定检测低至 10 fg 环状 DNA 模板，无酶对照 C1、无模板阴性对照 C2 无扩增杂带，微量低拷贝模板实验成功率显著提升。

2.扩增产量高：媲美进口主流品牌

图2. UniPhi29 DNA Polymerase 与进口竞品 Supplier A* RCA 扩增产量对比

实验条件：20 μL 体系，UniPhi29 DNA Polymerase 10 U，dNTP 1 mM，引物50 μM，42℃孵育 4 h，模板梯度 10 ng、100 pg 环状质粒。

实验结论：高、低两种模板投入量下，UniPhi29 DNA Polymerase 扩增总产量均媲美对标进口品牌，10 ng 模板单反应产物可达 15 μg 以上，完全满足规模化体外 DNA 合成、高通量样本建库的高产量需求。

3.WGA 单细胞测序数据均衡稳定，测序质控表现优异

图3. UniPhi29 DNA Polymerase 与进口竞品 Supplier A* 单细胞测序性能对比

实验条件：实验选取 0~5 个微量细胞作为起始模板，采用 UniPhi29 DNA Polymerase 介导 MDA扩增完成全基因组扩增；取 100 ng WGA 扩增产物作为建库起始模板，经 6 轮 PCR 预扩增、25 min 酶切片段化处理，构建基因组测序文库，文库主峰稳定集中于 300 bp 区间。酶切产物完成接头连接后，使用 0.6× 磁珠进行首轮纯化；文库扩增完成后以 0.9× 磁珠二次精细纯化，最终 42 μL 体系洗脱得到合格测序文库。

实验结论：0~5 个细胞样本，扩增产物大小在 2-100 kb 之间，产量≥ 5 μg；CV 值低于竞品 A*，扩增均一性更好。

4.高纯酶制剂，无外源核酸酶污染，下游无干扰

图4. UniPhi29 DNA Polymerase 外源核酸酶残留质控检测

实验条件与结论：

核酸外切酶：10 U 酶与 λDNA-HindⅢ 片段 37℃孵育 4 h，DNA 电泳条带无降解；

核酸内切酶：10 U 酶与质粒 37℃孵育 4 h，质粒线性化损耗＜10%；

RNase：10 U 酶与 293T-RNA 37℃孵育 4 h，RNA 条带完整无降解。

-25~-15℃保存，有效期2年。