产品描述

 

eTET1 增强型DNA双加氧酶是翌圣生物科技（上海）股份有限公司基于纳氏虫属DNA双加氧酶 (NgTET1）进行改造的重组融合突变体蛋白，具有更高的酶活性。eTET1可以将甲基化胞嘧啶 (5mC)经过三步连续氧化反应氧化成羧基化胞嘧啶 (5caC)。通过转化剂的作用，5caC进一步被转化成尿嘧啶 (U)，并通过PCR将尿嘧啶 (U)转化成胸腺嘧啶 (T)，从而达到单碱基分辨率和高准确性的DNA甲基化位点鉴定。

 

产品组分

 

 

运输与保存方法 

 

干冰运输。效期一年。-20°C保存，切不可搞错！

 

注意事项

 

一、关于操作

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。

3. 推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

4. PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染，进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离；配备文库构建专用移液器等设备；定时对各实验区域进行清洁（推荐使用ThermoFisher公司的DNAZap^TM高效核酸去除喷雾），以保证实验环境的洁净度。

5. 本产品仅用作科研用途！

二、应用范围

本试剂盒适用于DNA甲基化 (DNA 5mC)研究，针对的DNA投入量为1-200 ng，也提供了应用于RNA甲基化 (RNA 5mC)的可能性。

三、关于试剂和操作注意事项

1. eTET1为二价金属依赖性DNA双加氧酶，因此对氧化体系中EDTA较为敏感。请不要用包含EDTA的缓冲液溶解DNA材料。若使用EDTA的缓冲液溶解DNA材料，我们建议进行一轮DNA回收进行纯化，或者对eTET1 Enhancer的投入量进行重新滴定，以达到eTET1最佳的氧化效果。

2. eTET1 Enhancer的容易被氧化，收到后建议分装保存于-20°C。短时间内不用，建议-80°C保存。

 

使用方法

 

一、eTET1氧化甲基化胞嘧啶 (5mC)过程

 

图1 eTET1氧化甲基化胞嘧啶 (5mC)过程

二、操作步骤（操作前请仔细阅读操作注意事项）

1. 将表中试剂解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。配制eTET1氧化反应体系：

名称	体积 (μL)
DNA模板（不含EDTA，若含EDTA，见注意事项1）	24-25 (1-100 ng)
10× eTET1 Buffer	3
10× eTET1 Enhancer	1
eTET1 Enzyme Mix (5 mg/mL)	1-2
总共	30

2. 37°C反应1.5 h。

3. eTET1活性（使用荧光抗体法对eTET1活性进行测定）

 

 

图2 eTET1活性与其他TET酶活性比较

 

HB211124