产品描述

 

本试剂盒中的2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)是即用型的PCR预混合溶液，含有热启动Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化了实验的操作步骤，可以高通量操作并提高实验结果的重现性。本试剂盒中的PCR Enhancer是一种由多种成分组成的混合添加剂，在PCR反应中，PCR Enhancer能够有效降低高GC模板和具有复杂二级结构模板的解链温度，极大地减少DNA二级结构对PCR的影响，增加PCR反应的灵敏度和特异性，且兼容几乎所有DNA聚合酶的扩增体系。本试剂盒主要应用于动物基因型鉴定，建议搭配动物组织裂解组分（Cat NO.19698ES）一起使用，效果更佳。

 

产品组分

 

编号	组分	产品编号/规格
		10170ES50（50 T）	10170ES70（200 T）
10170-A	2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye)	500 μL	2 ×1 mL
10170-B	5 × PCR Enhancer	200 μL	800 μL

b）2× Tissue Direct PCR Mix (With Dye) 包含 PCR 扩增所需要的热启动 Taq DNA 聚合酶、dNTP 和 Mg2+等；已混有溴酚蓝染料作为电泳指示剂， PCR 产物可以直接进行电泳。

c）5 × PCR Enhancer ：高GC含量扩增（如大于65%）时，建议使用5 × PCR Enhancer。

 

运输与保存

 

冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。

 

PCR反应体系

 

组分	体积（μL）	终浓度
2× Tissue Direct PCR Mix（With Dye）	10	1 ×
Forward Primer（10 μM）	0.5	0.25 μM
Reverse Primer（10 μM）	0.5	0.25 μM
裂解产物（DNA模板）	2	-
无菌超纯水	To 20	-

【注】：各组分使用前应充分混匀。

a）模板使用量：建议总体系的5-20%之间，避免超过总体系的20%。

b）引物终浓度：反应性能较差时，推荐在 0.1- 0.5 μM 范围内调整引物浓度。

c）反应体系：推荐使用 20 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

e）对照反应：建议进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

 

PCR反应条件

 

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5 min	1
变性	94℃	10 sec	35
退火*	60℃	20 sec
延伸	72℃	20 sec
终延伸	72℃	5 min	1

*退火温度：请参考引物的理论 Tm 值，退火温度可设置低于引物理论值5℃，或通过梯度 PCR 确定最佳温度。  

 

注意事项：

 

1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响 PCR 效率。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服、佩戴口罩、眼罩、一次性手套等采取防护性措施进行实验操作。
3. 本产品仅作科研用途！

 

HB210811