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COA
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Hifair® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA为模板进行多重定量PCR反应的试剂盒。在实验的过程中，逆转录和定量PCR在同一反应管中进行，简化了实验操作，降低了污染的风险。
本试剂盒利用耐热Hifair® V Reverse Transcriptase高效合成第一链cDNA，并利用UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。本试剂盒主要包含优化的MP Buffer，Enzymes Mix等，缓冲液中已含有Mg2+和dNTP等，并添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升多重qPCR反应扩增效率的因子，能够保证引物扩增效率的同时，进行多达四重的反应。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
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|
13110ES60 (100 T) |
13110ES80 (1000 T) |
13110ES92 (10000 T) |
||
|
13110-A |
2×Hifair® V MP Buffera,b |
1.2 mL |
12 mL |
120 mL |
|
13110-B |
Hifair® V Enzyme Mixc |
100 μL |
1 mL |
5 mL×2 |
|
13110-C |
RNase Free H2O |
1.2 mL |
12 mL |
120 mL |
【注】a) 2×Hifair® V MP Buffer为Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的简写。
b) 不含Rox reference dye。如需，推荐使用货号10200ES产品。
c) Hifair® V Enzyme Mix主要包含有耐热Hifair® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor和UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
适用机型
ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;
Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.
运输与保存方式
冰袋运输。-20℃保存，有效期1年。本品避免反复冻融。建议分装保存。
注意事项
1. 实验过程中请使用RNase free耗材。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
反应体系
|
组分 |
体积（μL） |
体积（μL） |
终浓度 |
|
|
2×Hifair® V MP Buffer |
12 |
15 |
1× |
|
|
Hifair® V Enzyme Mix |
1 |
1.5 |
- |
|
|
Primer/Probe Mix (10 μM) |
1-4 |
1-4 |
0.4 μM |
|
|
模板 RNA |
1-5 |
1-10 |
- |
|
|
RNase Free H2O |
To 25 |
To 30 |
- |
|
【注】：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：Primer Mix中包含多对引物，通常每条引物终浓度为0.4 μM，也可以根据情况在0.1-1.0 μM间进行调整。
b) 探针浓度：Probe Mix中包含多条不同荧光信号的探针，每条探针的浓度可根据具体情况在50-300 nM间调整。
c) 模板稀释：qPCR灵敏度极高，建议将模板进行稀释使用，控制Ct值在20-35之间适宜。
d) 反应体系：推荐使用25 μL、30 μL或50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
标准扩增程序
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反应阶段 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
|
1 |
逆转录 |
50℃a |
10 min |
1 |
|
2 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
1 |
|
3 |
扩增反应 |
95℃ |
15 sec |
45 |
|
60℃b |
30 secc |
【注】
a) 逆转录：42℃或者50℃均可，时间10-15 min。
b) 扩增反应：扩增反应温度根据设计的引物Tm值进行调整。CDC官方推荐的ORF1ab和N引物，退火温度建议≥60℃。
c) 荧光信号采集：不同的qPCR检测仪器所需的荧光信号采集时间不同，请根据最短时间限制进行设置。
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原料应用类型 |
产品名称 |
货号 |
|
假病毒 |
11900ES |
|
|
一步法RT-PCR |
13110ES |
|
|
Hifair® V nCoV Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG防污染) |
13111ES |
|
|
逆转录用酶 |
11300ES |
|
|
10603ES |
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|
Murine RNase Inhibitor (200 U/μL, Glycerol-free)（无甘油版） |
10703ES |
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|
定量检测用酶 |
13086ES |
|
|
防污染系统 |
10303ES |
|
|
10128ES |
||
|
dNTP |
10125ES |
|
|
等温扩增用酶 |
12908ES |
HB200219
