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产品描述
N-糖苷酶 F (PNGase F)是一种酰胺水解酶，经过和平空间站伊丽莎菌克隆，主要由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌。并在 E. coli大肠杆菌中重组表达，可以裂解由天冬酰胺连接的高甘露糖、杂合和复杂的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位点为糖蛋白内侧N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间的酰胺键，同时将酶解后蛋白上的天冬氨酰转化为天冬氨酸。本产品带his和sumo标签，常应用于抗体及其相关蛋白完全去糖基化。
产品性质
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中文别名（Chinese synonym） |
N-糖酰胺酶F；N-糖苷酶 F |
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英文别名（English synonym） |
PNGase F |
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来源（Source） |
大肠杆菌表达 |
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分子量（Molecular weight） |
48.4 kDa |
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比活性（Specific activity） |
50000 U/mL |
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缓冲液组分（Buffer） |
20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol |
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酶活定义（Unit Definition） |
1个酶活力单位指在10 μL的反应体系中，37℃条件下1小时从10 μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。 |
产品组分
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编号 |
组分名称 |
组分成分 |
产品货号/规格 |
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20411ES01 |
20411ES02 |
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20411-A |
PNGase F |
PNGase F |
15000 U |
75000 U |
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20411-B1 |
Buffer 1（10×） |
5% SDS; 400 mM DTT |
150 μL |
750 μL |
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20411-B2 |
Buffer 2（10×） |
200 mM Tris, PH 7.5 |
300 μL |
1500 μL |
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20411-B3 |
10% NP-40 |
10% NP-40 in MilliQ-H2O |
300 μL |
1500 μL |
运输和保存方法
干冰运输；-20℃保存；有效期12个月。
使用方法
1、变性条件下蛋白质去糖基化：
1）在水中加入1 μL Buffer 1和目标糖蛋白（1-20 μg），至终体积10 μL；
2）100℃温度下煮沸10 min使其变性，冰上冷却，离心10秒；
3）加入2 μL的Buffer 2、2 μL的10％NP-40、6 μL去离子水，总反应体积20μL；
4）加入2 μL的PNGase，轻轻混匀。在37℃孵育1-3 h。
2、非变性条件下蛋白质去糖基化：
1）在水中加入2 μL的Buffer 2和目标糖蛋白（1-20 μg）至最终体积为 20 μL。
2）加入 2~5 μL 的 PNGase F, 轻轻混匀。
3）37°C 孵育 4-24 h。
注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。
注意事项
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、本产品仅作科研用途！
HB221031
