推荐应用
支原体PCR检测试剂盒(巢式PCR)(2G)是基于巢式PCR法(NestedPCR)对各种生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物和动物血清等)支原体感染的检测。该试剂盒采用定量PCR技术,针对支原体16S-23S rRNA序列保守区域设计两套引物,进行两轮PCR扩增,以第二轮扩增产物为准进行支原体污染情况判断。其可检出包括口腔支原体(M.orale)、肺炎支原体(M.pneumoniae)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)、精氨酸支原体(M.arginini)、鸡败血支原体(M.gallisepticum)、关节液支原体(M.synoviae)、发酵支原体(M.fermentans)、柠檬螺原体(Spiroplasma citri)、唾液支原体(M.salivarium)等在内的共34种支原体,灵敏度可达2.5 copies/uL,对于10 CFU/mL支原体标准菌株也可正常扩增有条带,具备特异性强、灵敏度高、操作方便快速等特点,可直接用于细胞培养上清液的检测。
本产品相较于常规PCR法支原体检测试剂盒,可避免由于引物与模板之间的非特异配对,导致非特异性产物的产生;还可灵敏的检测到样本中微量的支原体DNA,避免假阴性的产生。
检测种类多:优化的巢式PCR技术可检测多达34种支原体;
• 专属性强:针对16S-23S rRNA设计引物探针,不与梭菌、乳杆菌等亲缘物种交叉反应;
• 灵敏度高:检测限可低至2.5 copies/μL;
• 操作简便:样本制备和检测总时长可短至2h以内;
• 安全性高:试剂盒内阳性对照(PC)无感染性,完全消除污染风险。
检测限
1、本试剂盒第一轮PCR扩增产物灵敏度为1x103 copies/μL:

2、本试剂盒第二轮PCR扩增产物灵敏度为2.5 copies/μL:


专属性
1、检测范围:本2G版本巢式PCR支原体检测试剂盒检测了中外药典要求的10CFU/mL灵敏度的共8种支原体,均可检出。

PS:药典要求的支原体灭活菌株DNA模板浓度为10CFU/mL,鸡败血支原体、莱氏无胆甾原体由于样本不足未检测
| 组号 | 样本名称(英文) | 中文名称 | 是否检出 |
|---|---|---|---|
| 1 | Mycoplasma fermentans | 发酵支原体 | √ |
| 2 | Mycoplasma citri | 柠檬螺原体 | √ |
| 3 | Mycoplasma hyorhinis | 猪鼻支原体 | √ |
| 4 | Mycoplasma pneumoniae | 肺炎支原体 | √ |
| 5 | Mycoplasma orale | 口腔支原体 | √ |
| 6 | Mycoplasma synoviae | 关节液支原体 | √ |
| 7 | Mycoplasma arginini | 精氨酸支原体 | √ |
| 8 | Mycoplasma salivarium | 唾液支原体 | √ |
| 9 | PC | 阳性对照 | √ |
| 10 | NTC | 阴性对照 | × |
2、样本基质干扰:选取了14种常见样品基质和试剂盒中的阳性对照及其加标(2.5copies/μL阳性对照)、阴性对照(PCR Mix)做验证,14种基质均未检出支原体。


| 加样顺序 | 样本名称 | 加样顺序 | 样本名称 |
|---|---|---|---|
| 1 | MEM(1×) | 9 | RPMI medium |
| 2 | MCDB 131 | 10 | L-15 LEIBOVITZ MEDIA |
| 3 | F-12 | 11 | NUTRIENT MIXTURE-F-12 HAM'S |
| 4 | IMDM | 12 | RPMI Medium Modified |
| 5 | BME | 13 | Medium 199/EBSS |
| 6 | McCoy's 5A medium | 14 | DMEM/LOW GLUCOSE |
| 7 | DMEM | 15 | 阳性对照 |
| 8 | opti-MEM | 16 | NTC |
干冰运输,-25~-15℃保存,有效期1年。
*整个试剂盒若较长时间不用,请避光保存。其中40614-C长期不用时,可-85~-65℃冷冻保存。
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