产品简介

 

猪流行性腹泻病毒（PEDV）RT-qPCR 检测试剂盒包含了猪流行性腹泻病毒（PEDV）反应液（含引物探针），酶Mix，阴性对照（RNase-free H2O），阳性对照和内标。本产品含有 UDG 酶，可有效防止气溶胶污染风险，适用于猪流行性腹泻病毒

（PEDV）感染的辅助诊断。

 

产品信息

 

货号	11896ES50 / 11896ES60 / 11896ES80 / 11896ES92
规格	50 T / 100 T / 1000 T / 10000 T

 

组分信息

 

组分编号	组分名称	11896ES50(50 T)	11896ES60(100 T)	11896ES80(1000 T)	11896ES92(10000 T)
11896-A	PEDV RT-qPCR mix （Primer&Probe）	850 μL	1.7 mL	17 mL	170 mL
11896-B	PEDV Enzyme Mix	100 μL	200 μL	2 mL	20 mL
11896-C	Negative Control	250μL	500 μL	5 mL	50 mL
11896-D	Positive Control	250 μL	500 μL	5 mL	10 mL
11896-E	IC	50 μL	100μL	1 mL	10 mL

【注】 利用荧光定量 PCR 的检测方法，检测和区分环境样本中的猪流行性腹泻病毒（PEDV）。

 

储存条件

 

1、-25~-15℃保存，有效期 2 年。

2、11896-A 避光保存。

 

使用说明

 

1. 反应体系

组分	体积（μL）
11896-A	17
11896-B	2
11896-E	1
模板	1-10
RNase Free H2O	to 30

【注】 1、在监控提取过程时，推荐在样本中加入内标模板进行提取验证，通常是 100μL 样本加入 1μL 内标进行提取，同时在反应体系中将内标组分的 1μL 更换为 DEPC 水。

2、采用核酸提取试剂盒提取的各类样本中的病毒核酸，或自动化提取仪提取的各类样本中的病毒核酸，提取后的核酸于-20℃保存。

按上述体系配置反应液，建议最后加入模板，防止交叉污染。加入模板后，密封反应管，瞬时离心。每次实验均应设置阳性对照、阴性对照。将所有 PCR 扩增管放在荧光 PCR 仪上进行检测，FAM 通道采集目标荧光信号，Cy5 通道采集内标荧光信号。 

2. 参考扩增程序

1. 常规参考扩增程序

 

循环步骤	温度	时间	循环数
反转录	50℃	10 min	1
预变性	95℃	5 min	1
变性 退火/延伸	95℃ 60℃	15 sec 30 sec	45

 

2. 快速参考扩增程序（以 ABI Quant Studio 5 为例）

 

循环步骤	温度	时间	循环数
反转录	50℃	3 min	1
预变性	95℃	1 min	1
变性 退火/延伸	95℃ 60℃	3 sec 10 sec	45

 

3. 适用机型

包含但不限于以下仪器:

Thermo Scientific: ABI 7500，ABI Quant Studio 5；

上海宏石医疗科技: SLAN-96S。

 

4. 结果分析

1. 试剂盒有效性判定

11896-D 阳性对照，Cy5 通道内标稳定起峰，FAM 通道 Ct 值应Ct≤38 且出现特异性扩增曲线；

11896-C 阴性对照，Cy5 通道内标稳定起峰，FAM 通道应无 Ct 值或Ct 值≥38 且无特异性扩增曲线。

2. 检测结果的判定

根据下表对检测结果进行判定

序号	FAM	Cy5	结果判定
1	Ct≥40 或 UNDET	稳定起峰	阴性
2	Ct≤38	稳定起峰	阳性
3	38<Ct≤40 稳定起峰	需重新测试，Ct 值仍在此区间且有正常的扩增曲线，则判断为阳性，否则判断为阴性
4	Ct≤38、38<Ct≤40 或Ct＞40	不起峰	测试无效