载体构建技术是分子生物学和基因工程研究中的常用技术之一，用传统的方法构建多片段连接的复杂载体时，通常需要构建多个中间载体，多次的连接转化可谓费时费力。同源重组克隆作为一种新的克隆技术，可以在质粒的任何位点上进行一个或多个目的片段的插入，只需要一步重组即可完成载体的构建，极大地提高了工作效率。

 

同源重组克隆原理如下：在目的片段的两端引入同源臂后，重组酶5’端核酸外切酶活性将线性化载体和目的片段DNA的5'端降解，产生的单链末端两两配对；随后伴随着温度的上升，重组酶的DNA聚合酶活性针对缺失的碱基进行补充和添加；最后再由重组酶的连接活性将碱基间的缺口修复，得到一个完整的双链DNA。

 

 

 

翌圣生物匠心研发的同源重组克隆试剂盒自上市以来，广受好评。好的产品，从来不是偶然，好的口碑来自大众的反馈，接下来就由小翌带大家一起看看客户的的体验反馈吧！

 

 

Hieff Clone^® Plus One Step Cloning Kit (Cat# 10911)

 

反馈1：山东师范大学-1300 bp单片段克隆 

 

 

图1. 使用Hieff Clone^® Plus One Step Cloning Kit进行1300 bp单片段克隆。A：插入目的片段DNA电泳；B：实验组克隆生长状况；C：菌落PCR检测阳性克隆（条带大小均正确）。

 

 

反馈2：浙江大学-400 bp单片段克隆

 

 

图2. 使用Hieff Clone^® Plus One Step Cloning Kit进行400 bp单片段克隆。A：线性化载体质粒电泳（所用Marker为Marker 8000）；B：插入目的片段DNA电泳（所用Marker为Marker 5000）；C：实验组克隆生长状况；D：菌落PCR检测阳性克隆（条带大小均正确）。

 

反馈3：四川大学-2445 bp单片段克隆

 

 

图3. 使用Hieff Clone^® Plus One Step Cloning Kit进行2445 bp单片段克隆。A：pFastBac I质粒（带信号肽）电泳；B：pFastBac I质粒（带信号肽）酶切后的产物大小（EcoR I和Hind Ⅲ）；C：实验组克隆生长情况；D：菌落PCR检测阳性克隆（条带大小均正确）。

 

反馈4：天津中医药大学-2290 bp单片段克隆

 

图4. 使用Hieff Clone^® Plus One Step Cloning Kit进行2290 bp单片段克隆。A：line1为酶切载体片段，line2为PCR扩增目的片段；B：实验组克隆生长情况；C：菌落PCR验证阳性克隆。

 

 

 

Hieff Clone^® Universal One Step Cloning Kit (Cat# 10922 )

 

反馈1：植物研究所-975 bp单片段克隆

 

 

图5. 使用Hieff Clone^® Universal One Step Cloning Kit进行975 bp单片段克隆。A：线性化载体电泳；B：插入目的片段电泳；C：上图为实验组克隆生长状况，下图为阳性对照组；D：菌落PCR验证阳性克隆。

 

反馈2：武汉大学-1600 bp+1700 bp两片段克隆

 

图6. 使用Hieff Clone^® Universal One Step Cloning Kit进行1600 bp+1700bp两片段克隆。A：插入目的片段电泳，1为1.6 Kb目的条带，2为1.7 Kb目的条带；B：线性化质粒电泳；C：实验组克隆生长状况；D：PCR鉴定阳性克隆。

 

反馈3：清华大学-3600 bp单片段克隆

 

 

图7. 使用Hieff Clone^® Universal One Step Cloning Kit进行3600 bp单片段克隆。A：插入目的片段电泳；B：control是产品中的对照组转化情况，BD为实验组克隆生长情况；C：菌落PCR验证阳性克隆。

 

反馈4：南京农业大学-两片段和四片段重组克隆

 

 

图8. 使用Hieff Clone^® Universal One Step Cloning Kit进行两片段和四片段克隆。A：1-9号为PCR产物，6号为线性化的pACYC177，7号为线性化的pBR322；B：片段大体系电泳图；C：图为涂板12 h后的菌落生长情况，带×号为验证DH5α活性，pA2代表两片段重组质粒转化情况，pA4代表四片段重组质粒转化情况，pB2和pB4同理。D：PCR鉴定阳性克隆（pA用2号和5号片段的引物，pB用4号和5号片段的引物）和酶切鉴定，两种方法鉴定结果均正确。

 

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