背 景

活体成像技术（optical in vivo imaging）目前主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术，生物发光法是基于荧光素酶能催化底物（D-Luciferin或Coelenterazine）化学发光的原理，将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内，与后期注射入体内的底物发生反应，利用光学系统检测光强度，间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域，常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立，并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。

 

Coelenterazine腔肠荧光素

YEASEN提供三种coelenterazine类似物，分别是Coelenterazine，Coelenterazineh，Coelenterazine 400a。虽然三种都可用于相同实验，但是得到的结果有差异。
Coelenterazine：普遍认为是天然的腔肠荧光素，是海肾荧光素酶（Rluc）的作用底物，具有许多用途。可用于检测活细胞中钙离子浓度，基因报告分析，BRET（生物发光共振能量转移）研究，ELISA，HTS，组织或细胞中超氧阴离子和过亚硝酸盐的化学发光检测。
Coelenterazine h:与Renilla荧光素酶或Gaussia荧光素酶使用具有一定的局限性。体外研究中比其他类似物更适合与钙离子激活发光蛋白共用。据报道，Coelenterazine h的发光强度高于天然腔肠荧光素10-20倍，因此是用来检测钙离子浓度微小变化的有力工具。
Coelenterazine 400a: 是BRET研究中Rluc的首选底物，此腔肠素衍生物在390 nm和400nm之间发蓝色光，对GFP acceptor的光发射干扰小。
 

（1）Coelenterazine（天然腔肠荧光素）
分子式：C26H21N3O3 分子量: 423.48 g/mol 纯度：95% 保存：-15°C避光，保存在惰性气体下
Protocol：发光检测实验
1）使用管光度计室温下定量检测发光情况，每个样品做三个平行；
2）加入底物10s内立即检测，“integration time”为1 s；
3）对于细菌表达Gluc系统，甲醇溶解底物腔肠素制备10 mM储存液，终浓度为10μmol/L。储存液-20 °C保存，工作液制备过程需避光并置于冰上。 
 

（2）Coelenterazine 400 a/腔肠素400a
分子式：C26H21N3O 分子量：: 391.48 g/mol 纯度：95%
储存液制备：
1）开封前将瓶子放到室温温育，以避免产品发生任何的冷凝；
2）用125 μL无水乙醇溶解50 μg Coelenterazine 400 a，最终浓度是0.4μg/μL. ，轻轻混匀；（注：避免用DMSO或其他溶剂来溶解腔肠素400a，因为试剂可能被氧化）
3）分装后避光保存在-20°C，保持干燥； 

（3）Coelenterazine h/ 腔肠素h（from Caliper LifeScience Inc.）
RediJectCoelenterazineh为即用的注射型生物发光底物，特别设计用于体内成像研究。通过优化产品成分，降低冻融次数和严格控制不同批次的产品，使用Caliper公司的Coelenterazine h能确保客户得到高重复性的结果。
优 点：
◆预制配方，不同批次间严格控制特别设计用于体内研究；
◆即用型产品通过减少预成像准备步骤，减少时间和精力；
◆每瓶可用于5只动物的成像研究；（10 瓶/kit）
◆经IVIS成像系统验证，控制体内成像质量；
颜色：黄色溶液（溶于丙二醇/柠檬酸盐）
浓度：150 μg/mL （10瓶无菌溶液，每瓶含1.2 mL浓度为150 μg/mL的Coelenterazine h ）
保存： Store at ≤ -70 °C。
使用及注射剂量：
开始实验前，37 °C水浴锅解冻，避免重复冻融。静脉注射(i.v.)或腹腔注射(i.p.)。

1.   静脉注射：推荐使用剂量15 μg/mouse(100 μL/mouse），用1 ml注射器直接从瓶内吸取溶液，然后用25 gauge或更高的针头注射入小鼠体内。尽快成像检测以获得峰值信号。

2.   腹腔注射：推荐剂量是30 μg/mouse (200 μL/mouse)，方法同上。

应用实例：

Figure 1. RedijectCoelenterazine has been optimized for in vivo use with IVISimaging systems. (A) 5 pmol BRET Qdot 700* were injected intravenouslyin a nu/nu mouse. 10 minutes post BRET Qdot injection 15 μg/mouseCoelenterazine h was injected intravenously. Chart shows peak signal wasobserved right after injection at ~ 22 seconds followed by rapidclearance. Images were taken with IVIS kinectic. (B) 1,2 and 4 pmol BRETQdot 655 were injected subcutaneously in a nu/nu mouse. 10 minutes postBRET Qdot injection 10 μg/mouse Coelenterazine was injectedintraperitoneally. Chart shows that peak signal was reached around 27minutes post i.p. injection of Coelenterazine.
 

产品订购

货号	名称	产地	规格	报价/元
40904ES02	Coelenterazine天然腔肠荧光素	YEASEN	1×500μg	589.00
40904ES03	Coelenterazine天然腔肠荧光素	YEASEN	2×500μg	1049.00
40904ES08	Coelenterazine天然腔肠荧光素	YEASEN	5mg	3899.00
40905ES02	Coelenterazine 400 a/腔肠素 400a	YEASEN	1mg	1080.00
40905ES03	Coelenterazine 400 a 腔肠素 400a	YEASEN	5mg	3372.00
40906ES02	Coelenterazine h 腔肠素h	YEASEN	1×500μg	1329.00
40906ES03	Coelenterazine h 腔肠素h	YEASEN	2×500μg	2359.00
40906ES08	Coelenterazine h 腔肠素h	YEASEN	5mg	6759.00
40907ES10	Ready To Use Coelenterazine h 即用型腔肠素h	YEASEN	10 vials	5145.00
40908ES02	Coelenterazine f 腔肠素f	YEASEN	1×500μg	1329.00
40908ES03	Coelenterazine f 腔肠素f	YEASEN	2×500μg	2359.00
40909ES72	Coelenterazine cp 腔肠素cp	YEASEN	1×250μg	2359.00
40910ES72	Coelenterazine hcp 腔肠素hcp	YEASEN	1×250μg	2359.00
40911ES72	Coelenterazine n 腔肠素n	YEASEN	1×250μg	2359.00