基质胶是从富含胞外基质蛋白EHS小鼠肿瘤中提取出的可溶性基底膜制备物,其主要成分由层粘连蛋白,Ⅳ型胶原,硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和巢蛋白等组成,还包含生长因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织纤溶酶原激活物和EHS肿瘤自身含有的其他生长因子。
在1980年代中期由丹麦的 J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm二者分别发现并具体描述基质胶【1】,其主要生产过程是用盐水提取/洗涤肿瘤匀浆后可溶性蛋白质,再用溶剂萃取产物中不溶性复合物,在低温下使用缓冲液进行透析后获得无色到淡黄色溶液。
表:基质胶组分【1】
基质胶为组织和细胞提供支撑、抗拉强度和支架支撑,也可以作为细胞粘附和运动的三维亚结构以及生长因子、趋化因子和细胞因子的储存库,同时可作为细胞形态发生和分化的信号等。
翌圣生物开发生产的Ceturegel®基质胶不含LDEV(乳酸脱氢酶增高病毒),超低内毒素含量,并全部经过支原体检测保证无支原体污染,包括基本浓度、高浓度、低生长因子等不同类型基质胶。
应用方向
产品特点
特点:
安全性高:不含LDEV(乳酸脱氢酶增高病毒)
浓度多样性:浓度范围在8~20 mg/ml之间
批次稳定性好:严格生产质检过程保证批次间性能稳定
低内毒素:内毒素含量≤4 EU/ml
污染物检测: 经检测无支原体和细菌、真菌残留
单批产量高:单批产量在L级别以上
兼容性好:可与任何类型的细胞培养基兼容
迁移侵袭验证
图:迁移侵袭实验过程
1 基质胶铺板
首先将拿到的Ceturegel®基质胶冻融后按照原液1:8用无血清培养基稀释(终浓度不要超过3mg/ml)来包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃、30min使Ceturegel®基质胶聚合成凝胶,使用前进行基底膜水化。
2 制备细胞悬液
1将细胞饥饿12-24h以去除血清的影响(可选)。
2消化细胞,终止消化后离心弃去培养液并用PBS洗1-2次,用含BSA的无血清培养基重悬调整细胞密度至4×104~2×105个/ml。
3 细胞接种
1取细胞悬液100μl加入Transwell小室。
2在24孔板下室加入600μl含20%FBS培养基,添加时要避免下层培养液和小室间产生气泡,产生气泡易使下层培养液的趋化作用减弱甚至消失。
3培养细胞:常规培养12-48h(时间主要依癌细胞侵袭能力而定)。
4 结果统计
1取出Transwell小室,弃去孔中培养液,用不含钙的PBS清洗2遍,4%多聚甲醛固定30分钟,将小室适当风干。
2然后使用0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS洗3遍于400倍显微镜下随即五个视野观察细胞,记数。
图:细胞侵袭后经结晶紫染色的结果
FAQ
Q1拿到的基质有色差的变化(淡黄色到深红色)是什么原因?
A对于含酚红的基质胶主要原因是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的,但是与5%CO2平衡后色差即会减少。冻融后,轻轻摇晃试剂瓶使基质胶分散均匀。
Q2基质胶的操作要注意哪些事项?
A所有操作需在无菌环境下进行,应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。
Q3基质胶的如何分装冻存使用?
A可将冻融后的Ceturegel®基质胶分装在多个小管,所有分装均需用预冷的冻存管,迅速冷冻并保存,避免多次冻融。所有涉及到使用的物品在使用前需预冷,使用预冷的移液管、吸头及小管等操作基质胶。
[1] Kleinman H K , Martin G R . Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.[C]// Seminars in Cancer Biology. 2005.
相关产品
类型 |
货号 |
产品名称 |
应用方向 |
即用型 3-6 mg/ml |
40182 |
Ceturegel® Matrix Ready-to-use,LDEV-Free基质胶 |
适应于细胞培养、贴壁、侵袭和迁移实验以及细胞分化等研究 |
基本浓度 8-12 mg/ml |
Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶 |
适应于2D和3D培养、侵袭和迁移实验,也可以用于体内成瘤实验 |
|
Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 |
主要应用于需要颜色检测如荧光检测实验等 |
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高浓度 ≥18mg/ml |
Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free 基质胶 |
主要应用于如血管生成、凝胶栓塞和体内成瘤实验(对于血管生成建议基质胶终浓度要≥10mg/ml) |
|
Ceturegel® Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基质胶 |
|||
Ceturegel® Matrix High Concentration,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 |
|||
低生长因子 |
Ceturegel® Matrix GFR,LDEV-Free 基质胶 |
主要是排除生长因子对实验的干扰。应用于与生长因子、信号通路等相关研究。无酚红的也用来做类器官培养 |
|
Ceturegel® Matrix GFR,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 |
|||
干细胞用 |
Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基质胶 |
主要用于如hESC,iPSC等干细胞培养 |
|
类器官用 |
Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶 |
类器官培养专用基质胶 |
|
鼠尾胶原 |
Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾胶原蛋白I(大鼠源) |
侵袭和迁移。培养或分化研究 |
|
Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail 鼠尾胶原蛋白I型(小鼠源) |
侵袭和迁移。培养或分化研究 |
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