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细胞迁移侵袭实验中基质胶的应用


基质胶是从富含胞外基质蛋白EHS小鼠肿瘤中提取出的可溶性基底膜制备物,其主要成分由层粘连蛋白,Ⅳ型胶原,硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)和巢蛋白等组成,还包含生长因子如TGF-beta、EGF、IGF、FGF、组织纤溶酶原激活物和EHS肿瘤自身含有的其他生长因子。

 

1980年代中期由丹麦的 J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm二者分别发现并具体描述基质胶1】,其主要生产过程是用盐水提取/洗涤肿瘤匀浆后可溶性蛋白质,再用溶剂萃取产物中不溶性复合物,在低温下使用缓冲液进行透析后获得无色到淡黄色溶液。
 

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表:基质胶组分1】

 

基质胶为组织和细胞提供支撑、抗拉强度和支架支撑,也可以作为细胞粘附和运动的三维亚结构以及生长因子、趋化因子和细胞因子的储存库,同时可作为细胞形态发生和分化的信号等。

 

翌圣生物开发生产的Ceturegel®基质胶不含LDEV(乳酸脱氢酶增高病毒),超低内毒素含量,并全部经过支原体检测保证无支原体污染,包括基本浓度、高浓度、低生长因子等不同类型基质胶。 

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应用方向
 

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产品特点
 

特点:

  • 安全性高:不含LDEV(乳酸脱氢酶增高病毒)

  • 浓度多样性:浓度范围在8~20 mg/ml之间

  • 批次稳定性好:严格生产质检过程保证批次间性能稳定

  • 低内毒素:内毒素含量≤4 EU/ml

  • 污染物检测 经检测无支原体和细菌、真菌残留

  • 单批产量高:单批产量在L级别以上

  • 兼容性好:可与任何类型的细胞培养基兼容

     

迁移侵袭验证

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图:迁移侵袭实验过程

1 基质胶铺板

首先将拿到的Ceturegel®基质胶冻融后按照原液1:8用无血清培养基稀释(终浓度不要超过3mg/ml)来包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃、30min使Ceturegel®基质胶聚合成凝胶,使用前进行基底膜水化。

 

2 制备细胞悬液

1将细胞饥饿12-24h以去除血清的影响(可选)。

2消化细胞,终止消化后离心弃去培养液并用PBS洗1-2次,用含BSA的无血清培养基重悬调整细胞密度至4×104~2×105个/ml。

 

3 细胞接种

1取细胞悬液100μl加入Transwell小室。

224孔板下室加入600μl含20%FBS培养基,添加时要避免下层培养液和小室间产生气泡,产生气泡易使下层培养液的趋化作用减弱甚至消失。

3培养细胞:常规培养12-48h(时间主要依癌细胞侵袭能力而定)。

 

4 结果统计

1取出Transwell小室,弃去孔中培养液,用不含钙的PBS清洗2遍,4%多聚甲醛固定30分钟,将小室适当风干。

2然后使用0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS洗3遍于400倍显微镜下随即五个视野观察细胞,记数。
 

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图:细胞侵袭后经结晶紫染色的结果

 

FAQ
 

Q1拿到的基质有色差的变化(淡黄色到深红色)是什么原因?
 

A对于含酚红的基质胶主要原因是由于酚红和碳酸氢盐与CO2作用引起的,但是与5%CO2平衡后色差即会减少。冻融后,轻轻摇晃试剂瓶使基质胶分散均匀。

 

Q2基质胶的操作要注意哪些事项?
 

A所有操作需在无菌环境下进行,应使用预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。

 

Q3基质胶的如何分装冻存使用?
 

A可将冻融后的Ceturegel®基质胶分装在多个小管,所有分装均需用预冷的冻存管,迅速冷冻并保存,避免多次冻融。所有涉及到使用的物品在使用前需预冷,使用预冷的移液管、吸头及小管等操作基质胶。

[1] Kleinman H K ,  Martin G R . Matrigel: basement membrane matrix with biological activity.[C]// Seminars in Cancer Biology. 2005.
 

 

 

相关产品

类型

货号

产品名称

应用方向

即用型

3-6 mg/ml

40182

Ceturegel®  Matrix Ready-to-use,LDEV-Free基质胶

适应于细胞培养、贴壁、侵袭和迁移实验以及细胞分化等研究

 

基本浓度

8-12 mg/ml

40183

Ceturegel® Matrix LDEV-Free基质胶

适应于2D和3D培养、侵袭和迁移实验,也可以用于体内成瘤实验

40184

Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

主要应用于需要颜色检测如荧光检测实验等

 

高浓度

≥18mg/ml

40187

Ceturegel® Matrix High Concentration,LDEV-Free 基质胶

 

主要应用于如血管生成、凝胶栓塞和体内成瘤实验(对于血管生成建议基质胶终浓度要≥10mg/ml)

40189

Ceturegel® Matrix High Concentration,GFR,LDEV-Free 基质胶

40188

Ceturegel® Matrix High Concentration,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

 

 

低生长因子

40185

Ceturegel® Matrix GFR,LDEV-Free 基质胶

 

主要是排除生长因子对实验的干扰。应用于与生长因子、信号通路等相关研究。无酚红的也用来做类器官培养

40186

Ceturegel® Matrix GFR,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

干细胞用

40190

Ceturegel® Matrix hESC-Qualified,LDEV-Free 基质胶

主要用于如hESC,iPSC等干细胞培养

类器官用

40191

Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free 基质胶

类器官培养专用基质胶

 

鼠尾胶原

40125

Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾胶原蛋白I(大鼠源)

侵袭和迁移。培养或分化研究

40136

Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail 鼠尾胶原蛋白I型(小鼠源)

侵袭和迁移。培养或分化研究

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400-6111-883