首页/ 产品解读 / 新闻详情

酶切实验的这些坑,你肯定遇到过!

分子克隆作为分子生物学的一项成熟技术,几乎每个实验室都或多或少的会涉及。在分子克隆实验中,限制性内切酶是克隆必备产品,但大家也常常因为限制性内切酶的各种问题而感到烦扰。比如小翌常被问到的:

 

 

1

限制性内切酶种类这么多,不知道如何选择。

2

酶切不完全或出现乱切、错切的情况。

3

酶切速度慢,需要 1 h 甚至过夜酶切。

4

多酶切还需要选择多款酶切缓冲液。

 

针对第 1 个问题,小翌会简单介绍一下什么是限制性内切酶,不同内切酶的分类如何,让您对限制性内切酶有一个更全面的认识。

 

针对第 2~4 个问题,翌圣 FuniCut® 系列快速内切酶通过菌株改造,配合优化的工艺,可以轻松解决以上难题!

 

什么是限制性内切酶?

限制性内切酶是一种能够识别双链 DNA 分子中特定核苷酸序列,并在特定位置切割 DNA 链中的磷酸二酯键的一类酶,简称限制酶。

 

不同的限制性内切酶会识别不同的 DNA 序列,它可以在识别序列内或距识别序列不远的位置处切割DNA,酶切之后会形成不同类型的产物,如下图 1 中的 BamHI 形成 5’粘性末端产物,KpnI 形成 3’粘性末端产物,EcoRV 形成平末端产物。

1.png

图1.BamHI、KpnI、EcoRV 酶切示意图

 

限制性内切酶除了最常用于分子克隆实验中外,它还可以应用于疫苗研发生产、基因测序、SNP 鉴定、ddPCR 等领域。

 

限制性内切酶的命名

限制性内切酶的命名主要是根据细菌的属名、种名、菌株或血清型、发现的顺序而定,以 BstEII 为例,命名规则如下表一所示:

表1.限制性内切酶的命名规则

2.png

 

限制性内切酶的分类

根据结构的复杂程度、作用方式与辅因子的区别,限制性内切酶可分为四大类,下表二总结了各类的特点和典型酶种。

表2.不同限制性内切酶的区别

3.png

除了以上分类,根据识别和切割位点的异同可以分为3类,如下表三所示:

 

表3.同裂酶、异裂酶和同尾酶对比

4.png

 

针对目前市面上一些限制性内切酶还需要过夜酶切,比较花费时间精力,而且并还容易出现酶切产物不正确的情况,翌圣FuniCut®快速限制性内切酶为您排忧解难,通用缓冲液,5 min完成精准酶切,让您的酶切实验不再有烦恼。

 

翌圣FuniCut® 快速内切酶

产品特点:

1.快速酶切:5-15 min完成酶切,较常规酶切实验可减少1-2 h以上。

2.通用缓冲液:任意内切酶组合都能用同一缓冲液,多酶切反应更简便。

3.酶切效果:媲美进口品牌N*,且兼容其缓冲液。

4.直接电泳:提供红色Color缓冲液,酶切产物可直接点胶电泳,操作更简便。

5.精准酶切:即使过夜酶切,星号活性也极低。

 

性能展示:

1.在FuniCut®  Buffer中,5 min完成单、双和三酶切

 

6.png

 

M: 1 kb DNA Ladder

1:FuniCut® EcoRI

2:FuniCut® EcoRI+KpnI

3:FuniCut® EcoRI+KpnI+SmaI

C:未酶切质粒对照(含多个酶切位点)

 

图2.在通用的FuniCut® Buffer中,5 min可完成单、双和三酶切,如EcoRI+KpnI+SmaI三酶切。

 

2.酶切效果媲美N*、T*进口品牌,并且与其buffer兼容性好

7.png

 

M:1 kb DNA Ladder

1:Yeasen BamHI+ Yeasen Buffer

2:Yeasen BamHI+ T* Buffer

3:T* BamHI+T* Buffer

4:Yeasen BamHI+ N* Buffer

5:N* BamHI+N* Buffer

D:未酶切质粒对照(含2个BamHI位点)

 

图3.翌圣FuniCut® BamHI酶切效果与N*、T*进口品牌同类型产品相当,并且与N*、T*品牌的buffer兼容性好。

 

3.过夜酶切,星号活性极低

8.png

图4.分别使用翌圣、T*公司、N*品牌的HindIII、NheI、PstI、XbaI、XhoI快速内切酶,以λDNA为底物,按照各品牌推荐的实验体系,进行过夜酶切(16 h),酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳。

 

4.高度冗余,轻松应对一定程度的过量底物

9.png

图5.以 FuniCut® EcoR I、Eag I、XbaI、Sac I快速限制性内切酶,分别以1 μg、1.5 μg质粒为底物,酶切5 min,酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳。

 

产品列表及反应Buffer兼容表

点击图片查看产品

限制性内切酶产品列表

 

 

400-6111-883