X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷
----X-α-Gal在酵母双杂交中的应用
什么是X-α-Gal
X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物，用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选，快速和简便地识别阳性的蓝色克隆，无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。
X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因，编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色，即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可用来区分肠杆菌科内的不同物种以及划分乳酸菌和双歧杆菌。组织学研究中，X-α-Gal还可借助光学显微镜来检测组织的α-半乳糖苷酶活性。
X-α-Gal在酵母双杂交中的应用
图片来源：维基百科
完整的酵母转录因子GAL4从结构上以及功能上可以划分成相对独立的两个结构域: DNA结合结构域（BD）和DNA转录激活结构域（AD）。其中BD可以识别并结合GALA的上游激活序列UAS，而AD与BD相互靠近并结合会招募转录因子，从而促进下游转录机制的进行。在酵母双杂交系统中， 表达“诱饵”（bait）蛋白的cDNA构建到含BD的载体中，表达BD-bait融合蛋白，表达“猎物”（prey）蛋白的cDNA构建至含AD载体中，表达AD-prey融合蛋白。如果bait与prey蛋白之间有相互作用并能形成蛋白-蛋白复合物，可使AD和BD彼此靠近，从而激活下游转录机制的进行。通过检测报告基因表达与否，可以获取蛋白质间相互作用的有效信息。显色反应常常作为报告基因表达与否的检测方式，当MEL1作为报告基因时，表达的α-半乳糖苷酶，可使X-α-Gal显色底物变蓝。
X-α-Gal与X-gal的不同
X-Gal是β-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物，在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物，常需要配合IPTG使用用于蓝白斑筛选。而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶(MEL1)的反应底物。X-α-gal用作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。二者不可以互相替换。
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10903ES25 |
25 mg |
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