怎么使用潮霉素B筛选稳转株-----潮霉素B的应用
潮霉素B的作用原理
潮霉素B（Hygromycin B）是一种氨基糖苷类抗生素，由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生，通过破坏易位和促进80S核糖体的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。
目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。
潮霉素B的应用
● 筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）
大肠杆菌(Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。
● 由于作用模式的差异，潮霉素B常与遗传霉素G418，博来霉素和杀稻瘟菌素s联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株
它的作用模式与G418 (Cat#60220ES)、博来霉素(Cat#60257ES)和杀稻瘟菌素s (Cat#60218ES)不同，所以非常适合在双选实验中与另一种选择性抗生素联合使用。
● 抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效
● 作为驱虫药加入动物饲料中，饲养动物
● 潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000 μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500 μg/mL；细菌/植物细胞20-200 μg/mL；真菌200-1000 μg/mL。
潮霉素B的实验步骤
● 铺板：细胞培养至80-90%融合时，弃掉培养基，用1-2 mL PBS洗涤细胞两次，加入1mL Trypsin-EDTA溶液，充分洗涤细胞后，加入适量的胰蛋白酶消化液，将培养皿于37ºC放置数分钟使其在镜下大部分变圆即可终止消化，铺板密度约30%左右于5% CO2 37ºC 过夜培养。
● 根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。如哺乳动物细胞，可设定50、100、250、500、750、1000 μg/mL。根据储存液的浓度进行对应的稀释操作。
● 维持Hygromycin B 浓度，隔天换液，镜下观察。7 天后，选择能将未转化的细胞完全杀死的最低Hygromycin B 浓度，为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
化学性质
潮霉素B是类白色至微黄褐色粉末，有特殊气味，为弱碱，易溶于水、甲醇、乙醇等，易与许多有机酸和无机酸生成盐。
保存方法
溶液直接存放在2℃～8℃，可存放6个月以上。
注意事项
● 携带hph基因转染的细胞对潮霉素有抗性，转染细胞稳定或暂时表达该基因。
● 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了来自E. Coli.之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
产品推荐
翌圣生物的潮霉素B提供两种状态的产品，粉末(1 g/10 g)和溶液(50 mg/mL)，货号分别为60225ES、60224ES。
|
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
|
60224ES03 |
1 g (20 mL) |
849 |
|
|
60224ES10 |
10×1 g (20 mL) |
7396 |
|
| Hygromycin B 潮霉素B | 60225ES03 | 1 g | 719 |
| 60225ES10 | 10 g | 6599 |
客户使用该产品发表的科研文献（不完全统计：部分）
累计影响因子已达125以上！
[1] Zhao Q, Zheng K, Ma C, et al. PTPS Facilitates Compartmentalized LTBP1 S-Nitrosylation and Promotes Tumor Growth under Hypoxia. Mol Cell. 2020;77(1):95-107.e5. doi:10.1016/j.molcel.2019.09.018(IF:14.548)
[2] Wu LY, Shang GD, Wang FX, et al. Dynamic chromatin state profiling reveals regulatory roles of auxin and cytokinin in shoot regeneration. Dev Cell. 2022;57(4):526-542.e7. doi:10.1016/j.devcel.2021.12.019(IF:12.270)
[3] Zhang TQ, Chen Y, Wang JW. A single-cell analysis of the Arabidopsis vegetative shoot apex. Dev Cell. 2021;56(7):1056-1074.e8. doi:10.1016/j.devcel.2021.02.021(IF:12.270)
[4] Wang FX, Shang GD, Wu LY, Xu ZG, Zhao XY, Wang JW. Chromatin Accessibility Dynamics and a Hierarchical Transcriptional Regulatory Network Structure for Plant Somatic Embryogenesis. Dev Cell. 2020;54(6):742-757.e8. doi:10.1016/j.devcel.2020.07.003(IF:10.092)
[5] Zhu GD, Yu J, Sun ZY, et al. Genome-wide CRISPR/Cas9 screening identifies CARHSP1 responsible for radiation resistance in glioblastoma. Cell Death Dis. 2021;12(8):724. Published 2021 Jul 21. doi:10.1038/s41419-021-04000-3(IF:8.469)
[6] Chen J, Huang Y, Tang Z, et al. Genome-Scale CRISPR-Cas9 Transcriptional Activation Screening in Metformin Resistance Related Gene of Prostate Cancer. Front Cell Dev Biol. 2021;8:616332. Published 2021 Jan 26. doi:10.3389/fcell.2020.616332(IF:6.684)
[7] Jiang Z, Cui Z, Zhu Z, et al. Engineering of Yarrowia lipolytica transporters for high-efficient production of biobased succinic acid from glucose. Biotechnol Biofuels. 2021;14(1):145. Published 2021 Jun 27. doi:10.1186/s13068-021-01996-w(IF:6.040)
[8] Liu Y, Jiang X, Cui Z, Wang Z, Qi Q, Hou J. Engineering the oleaginous yeast Yarrowia lipolytica for production of α-farnesene. Biotechnol Biofuels. 2019;12:296. Published 2019 Dec 23. doi:10.1186/s13068-019-1636-z(IF:5.452)
[9] Zhou C, Zeng Z, Suo J, et al. Manipulating a Single Transcription Factor, Ant1, Promotes Anthocyanin Accumulation in Barley Grains. J Agric Food Chem. 2021;69(18):5306-5317. doi:10.1021/acs.jafc.0c08147(IF:5.279)
[10] Cui Z, Zheng H, Jiang Z, et al. Identification and Characterization of the Mitochondrial Replication Origin for Stable and Episomal Expression in Yarrowia lipolytica. ACS Synth Biol. 2021;10(4):826-835. doi:10.1021/acssynbio.0c00619(IF:5.110)
[11] Huang H, Zhong L, Zhou J, et al. Leydig-like cells derived from reprogrammed human foreskin fibroblasts by CRISPR/dCas9 increase the level of serum testosterone in castrated male rats. J Cell Mol Med. 2020;24(7):3971-3981. doi:10.1111/jcmm.15018(IF:4.486)
相关推荐
|
产品名称 |
产品货号 |
规格 |
|
60201ES05/25/60 |
5/25/100g |
|
|
60203ES10/60 |
10/100g |
|
|
60204ES03/08/25 |
1/5/25g |
|
|
60205ES08/25/60 |
5/25/100g |
|
|
60206ES10/60 |
10/100g |
|
|
60212ES25/60 |
25/100g |
|
|
60213ES60/80/90 |
100mg/1g/5g |
|
|
60214ES03/08/25 |
1/5/25g |
|
|
60215ES08 |
5g |
|
|
60217ES20/60 |
20/5×20mg |
|
|
60218ES10/60 |
10/10×10mg |
|
|
60219ES08 |
5g |
|
|
60220ES03/08 |
1/5g |
|
|
Puromycin (Solution 10 mg/mL) 嘌呤霉素盐酸盐溶液 |
60209ES10/50/60/76 |
1×1/5×1/10×1/50×1 mL |
|
Puromycin Dihydrochloride 嘌呤霉素盐酸盐 |
60210ES25/60/72/76/80 |
25/100/250/500 mg/1 g |
|
60228ES08/25 |
5/25g |
|
|
60230ES07/32 |
3.2/10×3.2g |
|
|
60231ES03/08/10 |
1/5×1/10×1mg |
|
|
60242ES03/10 |
1/10MU |
1. 嘌呤霉素：超实用干货—用嘌呤霉素筛个稳转细胞株
2. 金担子素：金担子素A(AbA)助力酵母单/双杂交研究的筛选标记
3. 抗生素系列：翌圣抗生素系列产品—让筛选更简易，让选择更广泛
