DNA建库解决方案:机械法文库制备VS酶切法文库制备
随着国家发改委《“十四五”生物经济发展规划》的发布，让生物技术赛道更加的火热。高通量测序技术作为生物技术中的高精尖技术，在生殖遗传、产前筛查、肿瘤伴随诊断、肿瘤早筛、心血管疾病用药与筛查、病原微生物检测应用越来越广泛。
而文库构建环节作为高通量测序整个环节中的重要一环，对测序结果的质量起到决定性的作用，片段化酶酶切的效果、片段加A的能力、接头连接的效率、文库扩增的保真性，最终都决定了测序下机数据质量，影响了报告结果的准确性。正是因为肿瘤用药等应用在终端客户使用的普遍性，使得对产品的价格、报告周期、质量的要求越来越高。
翌圣可根据客户不同的应用场景，不同的技术平台，不同的样本类型，精准为客户提供建库方案。对于肿瘤伴随诊断服务提供商，翌圣可为所有illumina平台和MGI平台提供相应的建库产品。肿瘤伴随诊断实验所用到的样本类型种类繁多：新鲜的手术组织、穿刺活检组织，石蜡包埋固定的手术组织、穿刺活检组织，血液gDNA，血液游离DNA，胸腹水沉渣DNA，胸腹水游离DNA等样本类型。根据不同的样本类型，选择不同的建库方式。
一、 机械法文库制备方案
机械法建库试剂盒可针对经过超声波片段化的DNA，或者是血液游离DNA或者降解度较高的FFPE样本DNA来建库。翌圣Ultima Pro类全能型建库试剂盒（CAT#12197）可满足以上样本类型的建库需求，本产品采用高质量的酶学组成，在前一代建库试剂盒的基础上，改进了DNA片段末端修复和加A效率，同时改善了接头连接效率。本试剂盒采用新型的高保真酶，显著提高扩增均一性和保真性。本试剂盒模板投入量可兼容100 pg-1000 ng所有DNA样本。
较高的文库产出：
以2种不同的cfDNA样本为模板，投入量为5ng，扩增循环数12，比较文库产出以及测序数据基础质量。
与竞品试剂盒相比，12197测序数据表现均一，Duplicate较低、mapping rate较高，结构变异更少，Mismatch更少。
二、 酶切法文库制备方案
翌圣OnePot系列酶切建库试剂盒是新一代建库试剂盒（CAT#12205），与传统的机械建库法比较，酶切法建库摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程。本品采用高质量的片段化酶，将片段化模块与末端修复模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。本试剂盒具有优秀的文库转化率，可应用于肿瘤伴随诊断的FFPE样本、gDNA样本等各种样本类型500pg-1ug起始模板投入量的酶切建库。同时，翌圣可为客户专业定制匹配自动化建库流程的建库试剂，提供全套解决方案，让高通量测序技术在基因检测上不再难！
产品优势：
试剂盒性能展示：
1. 高效稳定的片段化效果
●以Human Blood gDNA为模板，以不同的投入量（20ng~1μg）使用12205酶切12min，酶切产物纯化，进行2100质控。结果如下图所示：
● 用人gDNA NA12878样本，Input DNA: 200 ng，酶切时间：8/10/12/14/16 min，用Agilent 2100质检
结果如下图所示：
综上结果：片段化酶的酶切效果不会受模板投入量的影响，只与酶切时间相关。
2. 酶切偏好性更低
从上图中可以看出，与竞品相比，翌圣片段化酶的片段偏好性与竞品一致。
3. 超高的文库扩增保真性
从Lambda DNA全基因组建库测序分析，结果显示：Canace Pro保真性显著优于竞品的结果
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Sample |
Mismatch(N/10000) |
Insertion (N/1000000) |
Deletion (N/1000000) |
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Canace pro |
0.7807 |
0.6210 |
4.1144 |
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K* |
1.6132 |
1.3446 |
9.3257 |
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V* |
2.6568 |
1.9719 |
11.3092 |
产品订购
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产品分类 |
产品名称 |
产品货号 |
产品规格 |
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机械法建库试剂盒 |
12197ES08/24/96 |
8/24/96T |
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12199ES08/24/96 |
8/24/96T |
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13310ES08/16/96/98 |
8/16/96/192T |
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Hieff NGS® Ultima DNA Library Prep Kit for MGI® |
13311ES16/96 |
16/96T |
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酶切法建库试剂盒 |
12204ES08/24/96 |
8/24/96T |
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12205ES08/24/96 |
8/24/96T |
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13321ES08/16/96 |
8/16/96T |
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13322ES16/96 |
16/96T |
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末修加A模块 |
12605ES24/96/98 |
24/96/1000T |
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12608ES24/96 |
24/96T |
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片段化/末修/加A模块 |
12609ES24/96/98 |
24/96/1000T |
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12619ES24/96 |
24/96T |
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连接模块 |
Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module for kit |
12804ES24/96 |
24/96T |
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12805ES24/96/98 |
24/96/1000T |
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扩增模块 |
2×Super Canace® II Uracil High-Fidelity Mix for Library Amplification |
12620ES24/96/97 |
24/96/400T |
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12624ES24/96 |
24/96T |
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片段化酶 |
12907ES08/24/96 |
8/24/96T |
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末修单酶 |
12901ES60/76/90 |
100/500/2000U |
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12902ES76/86/92 |
500/2500/10000U |
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A尾添加 |
Hieff NGS® S-Taq DNA Polymerase for dA-Tailing |
13486ES24/96/98 |
24/96/1000T |
