体外核酸扩增是分子生物学研究的基础,其中PCR是第一个也是目前应用最广泛的核酸扩增技术。常规PCR技术依赖特定的仪器设备,存在扩增影响因素较多、价格昂贵、耗时较长等缺点,限制了其在基层及临床现场检测中的应用。
相比之下,等温核酸扩增技术(Isothermal Amplification Technology, IAT)只需恒温装置(如水浴锅),通过不同活性的酶及特异性引物在恒定温度下便能实现高效快速扩增核酸的目的,更适合病原体临床现场快速诊断。
图1.常规PCR技术与等温扩增技术IAT对比
等温核酸扩增技术根据不同的扩增原理可分为很多类,主要包括环介导等温扩增(LAMP)、交叉引物扩增(CPA)、链替代扩增(SDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、依赖核酸序列的扩增(NASBA)、滚环扩增(RCA)和依赖解旋酶的扩增(HAD)等。目前最常见、应用最广的当属日本学者Notomi等在2000年开发的环介导核酸等温扩增技术(LAMP)。LAMP的技术特征是针对靶基因上的六个区域设计四条引物,利用链置换型的BST DNA聚合酶在60~65℃恒温条件下进行扩增反应,在15-60 min内实现109-1010倍的扩增。