干货|限制性内切酶知多少？
分子克隆作为分子生物学的一项成熟技术，几乎每个实验室都或多或少的会涉及。在分子克隆实验中，限制性内切酶是克隆必备产品，但大家也常常因为限制性内切酶的各种问题而感到烦扰。比如小翌常被问到的：
1
限制性内切酶种类这么多，不知道如何选择。
2
酶切不完全或出现乱切、错切的情况。
3
酶切速度慢，需要 1 h 甚至过夜酶切。
4
多酶切还需要选择多款酶切缓冲液。
针对第 1 个问题，小翌会简单介绍一下什么是限制性内切酶，不同内切酶的分类如何，让您对限制性内切酶有一个更全面的认识。
针对第 2~4 个问题，翌圣 FuniCut® 系列快速内切酶通过菌株改造，配合优化的工艺，可以轻松解决以上难题！
限制性内切酶是一种能够识别双链 DNA 分子中特定核苷酸序列，并在特定位置切割 DNA 链中的磷酸二酯键的一类酶，简称限制酶。
不同的限制性内切酶会识别不同的 DNA 序列，它可以在识别序列内或距识别序列不远的位置处切割DNA，酶切之后会形成不同类型的产物，如下图 1 中的 BamHI 形成 5’粘性末端产物，KpnI 形成 3’粘性末端产物，EcoRV 形成平末端产物。
图1.BamHI、KpnI、EcoRV 酶切示意图
限制性内切酶除了最常用于分子克隆实验中外，它还可以应用于疫苗研发生产、基因测序、SNP 鉴定、ddPCR 等领域。
限制性内切酶的命名主要是根据细菌的属名、种名、菌株或血清型、发现的顺序而定，以 BstEII 为例，命名规则如下表一所示：
表1.限制性内切酶的命名规则
根据结构的复杂程度、作用方式与辅因子的区别，限制性内切酶可分为四大类，下表二总结了各类的特点和典型酶种。
表2.不同限制性内切酶的区别
除了以上分类，根据识别和切割位点的异同可以分为3类，如下表三所示：
表3.同裂酶、异裂酶和同尾酶对比
产品特点：
1.快速酶切：5-15 min完成酶切，较常规酶切实验可减少1-2 h以上。
2.通用缓冲液：任意内切酶组合都能用同一缓冲液，多酶切反应更简便。
3.酶切效果：媲美进口品牌N*，且兼容其缓冲液。
4.直接电泳：提供红色Color缓冲液，酶切产物可直接点胶电泳，操作更简便。
5.精准酶切：即使过夜酶切，星号活性也极低。
性能展示：
1.在FuniCut® Buffer中，5 min完成单、双和三酶切
M: 1 kb DNA Ladder
1:FuniCut® EcoRI
2:FuniCut® EcoRI+KpnI
3:FuniCut® EcoRI+KpnI+SmaI
C:未酶切质粒对照（含多个酶切位点）
2.酶切效果媲美N*、T*进口品牌，并且与其buffer兼容性好
M:1 kb DNA Ladder
1:Yeasen BamHI+ Yeasen Buffer
2:Yeasen BamHI+ T* Buffer
3:T* BamHI+T* Buffer
4:Yeasen BamHI+ N* Buffer
5:N* BamHI+N* Buffer
D:未酶切质粒对照（含2个BamHI位点）
3.过夜酶切，星号活性极低
图4.分别使用翌圣、T*公司、N*品牌的HindIII、NheI、PstI、XbaI、XhoI快速内切酶，以λDNA为底物，按照各品牌推荐的实验体系，进行过夜酶切（16 h），酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳。
4.高度冗余，轻松应对一定程度的过量底物
图5.以 FuniCut® EcoR I、Eag I、XbaI、Sac I快速限制性内切酶，分别以1 μg、1.5 μg质粒为底物，酶切5 min，酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳。
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