避免RNase污染，可以这么做...
RNase的来源
RNase是生物体的“保护伞”，可防止外源RNA入侵。如：生物眼泪、唾液、汗液等体液中均会分泌RNase。
• 环境中的RNase稳定性非常好
环境中存在的RNase主要是由微生物（细菌和真菌）所分泌，由一种微小紧凑的蛋白组成。它的结构中具有二硫键，因此具有稳定性极强的天然属性，极难灭活，热变性后也可以很快恢复构象。并且，RNase耐热、耐酸、耐碱，因此，它对众多去污方法均具有抵抗作用。
检测RNase污染的小Tips
由于RNase污染而导致实验失败，如何有效检测RNase污染源，是令实验人员头疼的事情。建议从以下几点进行排查：
• 检测缓冲体系、溶液：可启用批次的RNase-free试剂测试比对，也可检测疑似污染溶液中的RNase。
• 检测RNA样品：RNase进入RNA样本可在多种情况下发生，如RNA分离时（少量RNase在RNA制备过程中引入），或日常取用时（会不可避免地需要重复开关样品管并插入可能被污染的加样枪头）。
• 可用GAPDH、cyclophilin、或beta-actin等管家基因的探针，通过northern分析来评估poly(A) RNA样品的完整性。
从源头开始，避免RNase的污染
RNase的无处不在，使得实验过程中，难以保存RNA样本的完整性。因此，可以从源头入手，一方面要严格控制外源性RNase的污染，另一方面要最大限度地抑制内源性的RNase。
常见的污染源及其控制方法：
外源性污染源：
体液、水与缓冲液等溶液，枪头，离心管。
控制外源性RNase污染的方法：
操作人员全副武装
使用专业仪器与试剂
选择实验操作环境
其他注意的点
内源性污染源：
所有组织样品均含有内源性RNase。
抑制内源性RNase活性的方法：
样本保存
添加抑制剂
RNase抑制剂可有效避免RNase污染
RNase 抑制剂的类别较多，常用的RNase抑制剂有以下几类：
关于RNasin
RNasin能够保护mRNA的完整，有利于提高转录及翻译的效率，同时避免了使用有机化合物抑制剂可能带来的影响。
RNasin是从人胎盘或大鼠肝中提取的一种特异的酸性糖蛋白。其分子量为51 kDa，等电点pH值为4.7。RNasin对RNase A、RNase B或RNase C抑制能力极强，可快速特异地与它们以非共价键结合形成1:1的复合物，从而抑制RNase的活性，防止RNA被其降解。但需注意，RNasin不能抑制RNase I、T1、T2、H、U1、U2和CL3的酶活性。
目前，RNasin主要用于cDNA合成，体外转录，体外翻译，以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解；还可用于特定RNase活性的鉴定等。
翌圣生物提供高质量鼠源RNase Inhibitor
翌圣生物科技（上海）股份有限公司（以下简称“翌圣生物”）提供全面、高品质、高性价比的分子酶原料。翌圣生物的鼠源RNase Inhibitor，可用于RT-PCR/RT-qPCR，解决体外转录中RNA降解问题，抑制RNA分离纯化过程中RNase的活性。
产品特点 »
• 可以抑制RNase A、B和C
• 与 Taq 聚合酶、AMV 或 M-MLV反转录酶兼容
• 与人源RNase inhibitor相比，具有更高的抗氧化活性
• 适合于对高DTT敏感性实验(如RT-qPCR等)
活性定义 »
抑制5 ng RNase A活性的50%所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。RNase A活性通过水解Cyclic 2’,3’-CMP生成3’-CMP定量求得。
部分案例展示 »
在相同实验条件下，以qPCR方法分别对翌圣和R*公司的鼠源RNase抑制剂（MRI）的抑制效果进行检测，其结果如下图所示：
综合以上结果，翌圣鼠源RNase抑制剂能有效抑制体系中的RNaseA，抑制效果优于竞品。
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翌圣生物主要分子诊断酶原料
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原料类型 |
描述 |
产品名称 |
货号 |
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单酶原料 |
鼠源RNase抑制剂 |
10603ES |
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热启动聚合酶 |
10717ES |
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Taq酶单克隆抗体 |
31301ES |
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Taq酶单克隆双封闭抗体 |
31303ES |
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第五代耐热逆转录酶 |
11300ES |
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热敏UDG酶 |
10303ES |
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Bst DNA聚合酶 |
12908ES |
