干细胞分离与培养
骨髓间充质干细胞（BMSCs）在特定诱导条件下可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等细胞谱系。由于BMSCs易于分离和保存，免疫原性低、肿瘤风险低、伦理争议小等优势，其在细胞治疗和再生医学领域表现广阔的应用价值。今天小翌就来给大家分享BMSCs相关知识。
BMSCs细胞分离方法
差速贴壁法
概念：利用了BMSCs与骨髓中其他细胞的贴壁性能差异及酶消化敏感性差异而逐步达到纯化扩增
密度梯度离心法
概念：针对骨髓中不同细胞的大小和密度差异进行分选。
缺点：分选的细胞特异性有限，操作较难掌握
流式细胞荧光分选法( FACS)
概念：基于细胞表面标志物的分选方式主要通过特异性识别BMSCs上的表面抗原而针对性筛选出目的细胞
缺点：操作较复杂，对实验要求高，价格昂贵，细胞通量低而分选时间长，对细胞活性影响相对较大
免疫磁珠分选法( MACS)
概念：基于细胞表面标志物的分选方式主要通过特异性识别BMSCs上的表面抗原而针对性筛选出目的细胞
BMSCs细胞鉴定
• 在体外标准培养条件下，细胞必须是呈梭形形态的黏附细胞。
• 通过流式细胞术检测，细胞表面抗原表达CD105，CD73和CD90必须≥95%，同时表达CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79α，或CD19和HLA － DＲ必须≤2%。
• 细胞在标准体外分化条件下能够分化为成骨细胞、脂肪细胞和成软骨细胞。
BMSCs细胞培养
▍ 培养条件
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培养条件 |
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胎牛血清 |
同源性血清，多为10% |
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培养基 |
90%高糖DMEM |
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生长因子 |
人血清、血浆、血小板衍生生长因子、TGF-β1、IGF等 |
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谷氨酰胺 |
在低糖低氧培养而又所需能量比较高时，可以作为BMSCs生长的补充能量来源 |
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空气条件 |
5% CO2，95% AIR |
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支原体检测试剂 |
检测是否有支原体污染 |
▍ 消化、传代、冻存
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接种密度 |
2000～5000个/ cm2 |
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消化 |
一般贴壁细胞可使用Accutase细胞消化液 |
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冻存液 |
培养基50%、血清40%、DMSO 10% |
在细胞分离、鉴定、培养过程中，需要注意细胞是否受到支原体污染，支原体污染发生的频率很高，但常常被研究者忽视，原因在于支原体污染的培养液可能不发生混浊的现象，这就导致了很难被肉眼所观察到。被支原体污染的细胞生长变慢、状态变差，虽不会马上致死，但会影响其机体内的各种参数。
精品推荐
▲ 图2.一步法支原体检测操作流程
▲ 图3.Yeasen MycAway™ 支原体去除效果的展示
▍ 支原体去除试剂的特点
• 稳定性强：-20℃试剂能较长时间保存并保持高效用；
• 操作简单：只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可；
• 起效快：最快3天即可见效；
▲ 图4.支原体去除试剂细胞毒性检测图示
产品信息
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类别 |
产品 |
货号 |
规格 |
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支原体检测 |
40601ES10/20 |
10/20 assays |
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MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit |
40612ES25/60 |
25/100T |
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支原体去除试剂 |
40605ES02/03 |
1 / 2×500 mL |
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MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent |
40607ES03/08 |
1/ 5×1mL |
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支原体预防试剂 |
MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention |
40608ES03/08 |
1/5×1 mL |
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MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator |
40609ES60 |
100 mL |
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MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath |
40610ES60 |
100 mL |
