RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)贴壁细胞培养全攻略
RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)属贴壁细胞，大家细胞总是养不好、消化传代困难，实验数据不理想的罪魁祸首。除此之外，细胞生长缓慢、贴壁困难，也是大家在培养细胞过程中出现的最常见问题，今天小翌就来给大家整理一份RAW264.7细胞培养全攻略！！！
▲ 图源Pixabay
RAW264.7细胞具有强吞噬能力，细胞在吞噬抗原后释放趋化因子，促使细胞分化出伪足，因此造成细胞极难消化。细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都易促使细胞呈现梭形，造成最终实验数据不理想。
有时细胞看起来一切正常，但却生长缓慢，究其原因多半是感染了支原体，支原体感染导致生长变慢、状态变差，虽不会马上致死，但会影响其机体内的各种参数，且难以被观察到，是影响细胞状态的隐形杀手。
在日常培养过程中发现RAW264.7细胞容易出现的问题主要为以下几种：1.复苏不易成功2.细胞形态变异明显3.消化困难4.细胞生长缓慢，当你的细胞培养遇到上述瓶颈，不妨试一试以下几种解决办法。
复苏难以成功
原因：RAW264.7对空间十分敏感，复苏密度太高，细胞增殖太快，加剧细胞营养缺失，加速细胞老化。
解决办法：T75培养瓶复苏细胞数量控制在104~105
细胞变异明显
原因：细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促使该细胞呈现梭形、长梭形
解决办法：改善细胞培养环境，例如与细胞接触的玻璃器皿均高温灭菌，换flask培养瓶，采用一次性器具，使用质量较高的胎牛血清
消化困难
原因：细胞老化后，细胞伪足多且长，使细胞难消化，使用胰酶或细胞刮会对细胞损伤较大
解决办法：无需胰酶使用吸管重复吹打，可消化大部分正常状态的细胞；但若细胞为“长脚”状态，即使加入胰酶消化超过10min，也难以消化下来，勉强消化，对后续的实验数据也有较大影响。
生长缓慢
原因：支原体污染会导致细胞生长缓慢，甚至难以贴壁
解决办法：定期进行支原体检测（如翌圣生物一步法恒温支原体检测试剂），如发现支原体污染，即刻使用支原体去除试剂（如翌圣生物MycAwayTM 支原体去除试剂）
▲ 图1.一步法支原体检测操作流程
▲ 图2.Yeasen MycAwayTM 支原体去除效果的展示
▍ 支原体去除试剂的特点
» 稳定性强：-20℃试剂能较长时间保存并保持高效用；
» 操作简单：只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可；
» 起效快：最快3天即可见效；
▲ 图3.支原体去除试剂细胞毒性检测图示
限时线下促销正在进行，详情请咨询当地销售
|
类别 |
产品 |
货号 |
规格 |
|
支原体检测 |
40601ES10/20 |
10/20 assays |
|
|
MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原体检测试剂盒 |
40612ES25/60 |
25/100T |
|
|
支原体 |
40605ES02/03 |
1 / 2×500 mL |
|
|
MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原体去除试剂（1000×） |
40607ES03/08 |
1/ 5×1mL |
|
|
支原体 |
MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原体预防试剂（2000×） |
40608ES03/08 |
1/5×1 mL |
|
MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 细胞培养箱水盘1号消毒卫士 |
40609ES60 |
100 mL |
|
|
MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath |
40610ES60 |
100 mL |
最后就是小翌发福利的时候啦，关注翌圣公众号，回复消息“支原体”即可免费领取支原体检测试剂试用装哦，赶紧行动吧！
