一文Get原代细胞培养秘笈
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概述
▲ 图1.原代组织细胞培养（源于网络）
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特性 |
原代细胞 |
细胞系 |
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增殖能力 |
较弱 |
强 |
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繁殖代数 |
一般只能传10代以内 |
无限增殖，50代左右 |
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遗传物质完整性 |
遗传物质未改变 |
遗传物质发生改变 |
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生物特性 |
最接近临床样本 |
偏离临床样本 |
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培养容易程度 |
比较复杂 |
简单，易操作 |
在原代细胞培养的过程中，支原体污染发生的频率很高，但常常为人所忽视，原因在于支原体污染的培养液可能不发生混浊的现象，这就导致了很难被肉眼所观察到。
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原代细胞培养如何取材
▍ 皮肤和黏膜
主要取皮片，面积一般2-4cm2
» 无菌环境；
» 熟悉所需组织的类型和部位；
» 要避开破溃、坏死、液化部分，以防污染、尽量去除混杂的结缔组织。
▍ 血液细胞
» 取材时应注意抗凝。
▍ 骨髓、羊水、胸/腹水细胞
▍ 动物组织取材-鼠胚组织
» 将其浸泡在含75%酒精的烧杯中，5分钟后取出动物；
» 在消毒过得木板上可用无菌的图钉固定四肢，切开皮肤；
» 用无菌操作法解剖取胚。
▍ 动物组织取材-幼鼠胚肾/肺
» 腹部朝上固定在木板上，先切开游离毛皮并拉开至两侧；
» 采用无菌法打开胸腔取肺，或从背部打开腹腔取肾。
▍ 鸡、鸭、鸟类胚胎组织
» 将胚蛋至于蛋架上，先将温水清洗蛋壳，再用75%酒精棉球擦干，经碘酒、75%酒精消毒后，在无菌条件下采用无菌法用剪刀或镊子打开气室，沿气室边缘去除蛋壳；
» 用眼科镊子撕去壳膜，暴露出鸡胚；
» 用弯头镊挑起胚头，取出胚胎，放入无菌平皿中，解剖取材。
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常见问题
Q1：细胞量太少，长不起来怎么办？
有几种办法，如对没消化完的组织块反复消化，尽量多收集一些细胞；并且尽量传代到小皿里，如6孔板都可以。若是细胞仍太少，应耐心等待，尽量不要传代，只换液。
Q2：皮肤组织作为正常组织，与肿瘤组织分离主要区别在哪里？
首先，皮肤组织需要用中性分离酶dispaseII将表皮分离出来；其次，在消化时，用的是胰酶，而非胶原酶，并且胰酶的浓度用的是0.05%，而不是0.25%。
Q3：细胞难以贴壁怎么办？
为了尽快促进细胞贴壁，可以提前1h将0.5%的明胶铺于培养板。另外，如果细胞被污染了肯定不贴壁，建议做支原体检测，结果如果是阳性，立即加入支原体去除试剂，挽救您的细胞，咱们小翌可以为你的细胞提供全方位的护航！
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精品推荐
▍ Yeasen 40612 只要一步法即可检测支原体的存在
▲ 图2.一步法支原体检测操作流程
▲ 图3.Yeasen MycAwayTM 支原体去除效果的展示
▍ 支原体去除试剂的特点
» 稳定性强：-20℃试剂能较长时间保存并保持高效用；
» 操作简单：只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可；
» 起效快：最快3天即可见效；
▲ 图4.支原体去除试剂细胞毒性检测图示
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产品信息
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类别 |
产品 |
货号 |
规格 |
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支原体检测 |
40601ES10/20 |
10/20 assays |
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MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原体检测试剂盒 |
40612ES25/60 |
25/100T |
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支原体 |
40605ES02/03 |
1 / 2×500 mL |
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MycAway™ Treatment (1000×)-Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原体去除试剂（1000×） |
40607ES03/08 |
1/ 5×1mL |
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支原体 |
MycAway™ Prophylactic (2000×)-Mycoplasma Prevention MycAway™ 支原体预防试剂（2000×） |
40608ES03/08 |
1/5×1 mL |
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MycGuard™-1 Solution (100×), for Disinfecting Water Bath of CO2 Incubator 细胞培养箱水盘1号消毒卫士 |
40609ES60 |
100 mL |
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MycGuard™-2 Solution (500×), for Disinfecting Ordinary Water Bath |
40610ES60 |
100 mL |
