手把手教你做出RT-qPCR最美曲线(一)：1:1提取高品质RNA
RNA提取是RT-qPCR实验成功的首要步骤，RNA的质量直接关乎RT-qPCR实验的结果。但是在实验过程中我们经常会碰到RNA提取实验翻车的情况，主要是因为RNA的分子结构不稳定和无处不在的RNase对RNA的降解造成的。
由此可见，想要提取到高质量的RNA并非易事。今天，小翌主要从样本选择、样本采集与保存、RNA提取这三个方面来阐述RNA提取过程需注意的关键要点，以辅助后续的qPCR实验顺利进行。
样本的选择
样本最好选择处于生长旺盛期的新鲜细胞，新鲜、生长旺盛的动物组织，新鲜幼嫩的植物组织。
样本采集和保存
» 快速处理：获取样本后，最好立即提取RNA，或者在液氮中速冻样本≥1h，之后冻存于-80℃冰箱。
注：Trizol为裂解液，可用于保存细胞，但不适用于组织样本保存。当细胞存放在Trizol中需注明每管的细胞数量。
其他Tips
» 避免环境中RNase的污染
常见的RNA提取方法
1. 沉淀法
» 原理
Trizol中含有苯酚、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇，可裂解样本释放核酸，并抑制RNase活性。加入氯仿离心分层，收集上清，经异丙醇沉淀得到总RNA
» 原理
高盐吸附、低盐洗脱
» 特点
培养细胞RNA提取试剂盒(货号：19231）
组织/细胞RNA提取试剂盒（货号：19221）
多糖多酚植物RNA提取试剂盒（货号：19292）
在此，给大家介绍一款11min即可完成培养细胞RNA提取的的柱式提取试剂盒：培养细胞RNA提取试剂盒（Cat No.19231）。
» 产品特点：
» 案例展示：
使用培养细胞RNA提取试剂盒（Cat No.19231）和O品牌常规细胞/组织RNA提取试剂盒各提取2份293T细胞（10^6个细胞）的总RNA。结果显示，该试剂盒提取到的目标RNA产量一致，但纯度更高，如表1和图2。
表1. Nanodrop测定RNA浓度
备注：Y1，Y2代表培养细胞RNA提取试剂盒（Cat No.19231）；O1，O2代表O品牌常规细胞/组织RNA提取试剂盒
▲ 图2a.hGAPDH扩增结果
▲ 图2b.hBC6扩增结果
图2. 培养细胞RNA提取试剂盒的定量结果与O品牌基本一致。取1 μL洗脱液反转录，以cDNA的10倍稀释液为模板，定量测试 hGAPDH 和 hBC6 2个基因
综上，小翌从样本选择、样本采集与保存、RNA提取这三个方面阐述了提取高质量RNA的关键要点，下期小翌将讲解RNA质量评估以及RNA降解对qPCR实验结果的影响等方面的内容，我们下期不见不散~
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类别 |
产品名称 |
货号 |
规格 |
目录价/元 |
促销价/元 |
|
RNA提取 |
10606ES60 |
100mL |
553 |
320 |
|
|
19231ES50 |
50T |
1183 |
828 |
||
|
19221ES50 |
50T |
893 |
625 |
||
|
19292ES50 |
50T |
1255 |
878 |
||
|
逆转录 |
Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus) |
11141ES60 |
100T |
1383 |
798 |
|
qPCR |
11184ES08 |
5*1mL |
663 |
买5送1 买10送3 买20送8 买40送20 |
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