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精品推荐|快速、高产的RNA体外合成方法

利用RNA体外合成(IVT)技术制备的mRNA疫苗在COVID-19传染病的防治上产生了巨大的影响,无论是其开发生产周期以及疫苗的安全、高效性都明显优于传统疫苗,因此具有极大的发展潜力

mRNA疫苗主要是体外合成RNA,是以DNA为模板通过体外转录得到,常用的是以线性化质粒DNA或PCR扩增产物为模板利用RNA聚合酶在体外转录合成再进行修饰获得。是利用含有T7启动子(TAATACGACTCACTATAGGG)或SP6启动子(ATTTAGGTGACACTATAG)序列的DNA为模板在含有T7或SP6 RNA聚合酶的条件下,以NTP为底物合成与模板DNA中一条链互补的mRNA,简单快速获得大量的mRNA分子,通过在5’端加上帽子结构和3’端加ployA尾加强mRNA的稳定性。

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 图2.体外转录(IVT)mRNA生产和装配过程[1]

 

体外合成RNA应用方向

 
 
RNA结构与功能研究
 
 
RNAi研究
 
 
探针杂交应用
 
 
mRNA疫苗、药物开发
 
 
显微注射
 

体外合成RNA常见问题和困惑

 
 
01
如何获得所需的转录模板?
02
为什么自己配置反应体系无论如何优化都无法获得足够高的产率?
03
有没有一款包含全套反应试剂的Kit,让我不再为体系配置而烦恼?
04
有没有一款性价比高T7 Kit,让费用问题不再是我科研和生产路上的拦路虎?
05
有没有一款试剂盒适用于多种类型RNA的合成?
......
 
翌圣生物开发出的高性价比的T7高产量体外合成试剂盒包含一整套的RNA合成所需试剂,并配有详细的教程。本试剂盒可以合成长转录本以及短转录本,以1μg的模板投入量可以产生100-200 μg的RNA,适用于单链 RNA合成和以Cap analog为引物合成Capped mRNA。
 

T7Kit测试数据

 
高浓度的RNA是后续开发RNA相关高产量产品的关键所在,因此加入高浓度的RNA才能达到产品高产的效果。翌圣开发出的Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit以1μg的模板投入量可以产生100-200 μg的RNA,可以完全满足要求。
 
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 图3.不同目的片段的转录后电泳图
 

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 图4.不同目的片段的转录产量
 
在影响RNA相关产品的质量成败的关键因素中,合成的RNA的品质也是关键一环。因为合成的RNA的纯度(即品质)不好,对产品的产率会产生很大影响。翌圣Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit所合成的RNA经过安捷伦2100测定,其纯度单一,说明合成后的RNA品质纯度高,对产品的产率会有很大提升。

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<不同长度RNA转录>

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<RNA转录品质测定>(安捷伦2100)
 

 图5&图6.不同长度RNA转录及品质测试
 
翌圣生物提供您简便、高品质、高性价比的T7合成试剂盒以及相关对应产品,助力您的科学研究和药物及疫苗的开发,共同为人类的未来健康事业奉献一份力量。
 

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产品名称

货号

规格

Hifair®T7 High Yield RNA Synthesis Kit

10623ES50/60

50/100 T

 

 

 

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10617ES92/97

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10618ES90/96

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10619ES02

0.5 mL

GTP Solution(100mM)    

10132ES03

1 mL

NTP Set Solution(ATP,CTP,UTP,GTP,100 mM each)

10133ES03

1 Set (4 vial)

 

参考文献
 
【1】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, ,Tailoring mRNA Vaccine to Balance Innate/Adaptive Immune Response,Trends in Molecular Medicine,Volume 26, Issue 3,2020,Pages 311-323,
 
 

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