自1990年萤光素酶生物传感器技术诞生,时至今日,萤光素酶报告基因的检测系统被广泛应用于细胞信号通路、siRNA/miRNA、免疫应答、药物筛选等研究。萤光素酶报告基因检测系统中具有代表性的是萤火虫萤光素酶报告基因和海肾萤光素酶报告基因,由于两种酶底物和发光颜色的区别,且在动物体内无内源性表达,使其在单、双报告实验中得到广泛应用。
检测原理
萤火虫萤光素酶是一种胞内蛋白,大小为61KDa。在氧气、ATP和镁离子同时存在的条件下,催化底物萤火虫萤光素氧化,生成氧化萤光素,并发出黄绿色光,其最强发光波长为560nm。
海肾萤光素酶也是一种胞内蛋白,大小为36KDa。只需要氧气就可以催化腔肠素,氧化生成高能产物coelenteramide,并发出蓝光,其最强发光波长为465nm。
检测方法差异
对于萤光素酶的化学发光与检测模式上存在以下差异:
• 化学发光根据发光的形式和种类分为闪光型(flash-type)和辉光型(glow-type)两种类型;
• 在检测方法上分为非均质检测与均质检测;
那么在萤光素酶检测实验中如何进行报告基因检测试剂的选择呢?接下来让我们一探究竟~
◎ 闪光型与辉光型差异
◎ 非均质型与均质型差异
• 非均质型
优势:可留样检测(裂解液可保存用于后续检测);
劣势:操作繁琐。
• 均质型
优势:操作简单(裂解检测仅需一步);
劣势:不可留样检测。
检测方法选择
精品推荐
◎ 非均质闪光型报告基因检测(货号:11401、11402)
• 产品特点
1. 裂解能力更强:能够彻底裂解绝大部分种类细胞。
2. 信号更强:能够精准检测弱启动子的表达。
3. 灵敏度更高:可检测低至10‐20摩尔萤光素酶分子。
4. 线性范围更广:线性检测范围超过酶浓度的8个数量级。
• 应用方向
精准测量转录调控,miRNA靶基因验证,转录因子和启动子研究等。
• 数据展示
图1. Yeasen(货号:11402)荧光强度与P品牌相当,可完美替换进口品牌。
◎ 均质型辉光型报告基因检测(货号:11404、11405)
• 产品特点
1. 信号稳定:半衰期长(达2h),非常适用于高通量检测,再也不用担心萤光信号淬灭的问题。
2. 操作简便:只需要加样-读值,即可完成实验,挤出更多时间发paper。
3. 准确度高:我有海肾萤光素酶的底物——腔肠素,可校正孔间细胞数量、转染效率的误差。
4. 兼容性好:可用于多种常用细胞培养液,如RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等。
5. 无刺激性气味:还你一个清新愉快的实验室环境。
• 应用方向
Fc effector检测系统,免疫检查点检测系统( immune checkpoint assays),细胞因子、生长因子检测和抗体内化研究的检测系统等。
• 数据展示
图2. Yeasen(货号:11405)荧光强度和稳定性与P进口品牌相当。
订购信息
类别 |
产品名称 |
产品货号 |
闪光型 |
11401ES60/76/80 |
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11402ES10/60/80 |
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辉光型 |
11404ES10/60/80 |
|
11405ES10/60/80 |
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