什么是感受态细胞?
感受态细胞(competent cell):是指受体(宿主)细胞最易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。主要原理是通过处理使细胞的通透性变大(细胞膜表面出现一些孔洞),便于外源基因或载体进入感受态细胞,在感受态细胞中得到复制扩增,得到多个拷贝的外源基因或载体。
感受态细胞的分类
根据不同实验目的,感受态细胞来源有原核受体细胞(大肠杆菌G-、乳酸菌G+、枯草杆菌G+等 )和真核受体细胞(酵母菌、动植物、昆虫等)。大肠杆菌作为构建普通质粒、病毒载体和各种文库以及异源蛋白表达的重要工具,其相应的感受态在分子克隆实验与蛋白表达实验中是极其重要的。
不同感受态细胞的区别是什么呢?
目前市面上的大肠杆菌细胞种类相当多,其都是为了特定的目的而构建的,比如:高速生长/分裂,高通量克隆,普通克隆等。那不同的感受态之间的区别是什么呢?答案是基因型(即感受态的身份证),不同基因型的大肠杆菌可以满足不同的实验目的。
感受态细胞说明书的基因型部分写的recA,deoR,lacZ,DE3,pLysS都代表什么意义呢?今天小翌根据几个方向的实验目的给大家介绍一些常见的基因型以及意义。
提高外源质粒的完整性和稳定性
提高转化效率
代谢相关基因型
不同的蛋白表达机制
以上是众多细胞基因型中的一小部分,还有很多不常见的变异菌株,可适用于更加特殊的实验目的,小翌就不过多介绍了。
对于感受态细胞的选择,小翌给大家介绍下几种常见的大肠杆菌感受态细胞及其应用方向。
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11801ES80 |
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