——核酸消除的“终极武器”
 

 

翌圣生物研发团队利用一流的基因工程改造技术，研制而成的核酸去除的“终极武器”—非限制性核酸内切酶，既保证了产品的纯度与酶活，又确保了产品的稳定性，目标客户攘括工业端与科研端两大科学研究链，可满足广大生物研究者的基本需求。

翌圣核酸酶，严格把控，品质优先
 

1、质检项目

货号	表达宿主	活性	内毒素去除	浓度	纯度SDS-PAGE	纯度SEC-HPLC	细菌检测	蛋白酶检测
翌圣20125（工业）	酵母菌	√	√	√	√	√	√	√
翌圣20156（科研）	大肠杆菌	√		√	√
翌圣20157（工业）	大肠杆菌	√	√	√	√	√	√	√

2、质检结果

核酸内切酶超强特性
 

特性一：耐受性强

能够与多种细胞裂解液同时使用，如RIPA；与含有多种离子和非离子型去污剂、还原剂的蛋白提取试剂等兼容。

试剂	耐受剂量	耐受程度
盐酸胍	>100 mM	完全抑制Benzonase活性
EDTA	1 mM	部分抑制Benzonase活性
	5 mM	活性丧失90%
PMSF	1 mM	不会抑制Benzonase活性
Triton® X-100	浓度<0.4%	保持70%的活性
	浓度<0.4%<1%	活性急剧降低
	浓度＞1%	活性丧失70%
SDS	浓度在0.1%~1%	活性急剧降低
尿素	>6 M	活性急剧降低

特性二：核酸内切酶操作简易，轻松使用

1、推荐使用条件

条件参数	最佳条件	有效条件
Mg2+	1-2 mM	1-10 mM
pH	8-9	6-10
温度	37℃	0-42℃
DTT	0-100 mM	>0 mM
巯基乙醇	0-100 mM	>0 mM
单价阳离子	0-20 mM	0-150 mM
磷酸根离子	0-10 mM	0-100 mM

2、推荐使用量

实验类型	蛋白电泳样品	药物生产-1g	疫苗、病毒生产-1L	细胞培养-1L
推荐产品	Nuclease（科研级，20156）	Nuclease（无内毒素级，20125，20157）
最低要求	125 U（0.5 µL）	25 U/mL（1 µL）	0.1 U/mL（0.4 µL）	0.1 U/mL（0.4 µL）
建议用量	500 U（2 µL）	250 U/mL（10 µL）	25 U/mL（100 µL）	5 U/mL（20 µL）
孵育时间	通常作用时间37℃在15~60 min；25℃在30~120 min；
注：以上仅仅是推荐，可根据实验自主摸索最优实验条件。

助阵四方，应用甚广
 

应用1，除去生物制品中的DNA/RNA

核酸内切酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工业生物制品中核酸的去除，使生物制品的最终核酸含量符合要求，同时提高生物制品功效。并且研究者还提供了一种可获得HIV测序文库的方案HIV-SMART，其中核酸内切酶的运用，可显著提高HIV病毒测序覆盖度，且不影响病毒核酸的回收率。

图3 （+）添加和（-）不添加核酸内切酶处理的CHU1756NGS覆盖图^[1]

应用2，用于降低细胞破碎后的粘度

核酸内切酶可以降解所有形式的核酸，降低细胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分离效果，使之易于过滤（尤其是超滤），利于下游层析纯化操作。

 

图4 细胞裂解液Nuclease处理（A）和未处理（B）比较图

应用3，生化分析样品的制备

在ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程中，用核酸内切酶处理含有核酸的蛋白样品，可提高分辨率，并提高回收率。

 

图5  小鼠脑核蛋白Nuclease处理（A）和未处理（B）双向电泳比较图^[2]

应用4，CAR-T治疗相关行业（慢病毒包装）

 

FAQ——如何摆脱后续核酸内切酶干扰？
 

措施1：采用高于1mM EDTA螯合金属离子会可逆地抑制全能核酸酶活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃处理30 min等；

措施2：对于带某种标签的Nuclease核酸内切酶可通过相应的标签蛋白纯化树脂直接去除，去除率>95%；

措施3：对于不带标签的Nuclease核酸内切酶，可通过色谱纯化去除核酸内切酶，然后可通过检测残留活性或ELISA检测来判断去除是否成功。

产品订购信息
 

产品	货号	规格	价格（元）
UCF.ME Nuclease Ultrapure（Endotoxin-free）	20125ES25	25 KU	1125.00
	20125ES50	50 KU	1965.00
	20125ES60	100 KU	3245.00
UCF.ME Nuclease 全能核酸酶	20156ES25	25 KU	418.00
	20156ES50	50 KU	768.00
	20156ES60	100 KU	1398.00
UCF.ME Nuclease（GMP Grade） 全能核酸酶（GMP级）	20157ES25	25 KU	1125.00
	20157ES50	50 KU	1965.00
	20157ES60	100 KU	3245.00

 

文献引用
 

[1] Berg M G, Yamaguchi J, Alessandri-Gradt E, et al. A pan-HIV strategy for complete genome sequencing[J]. Journal of clinical microbiology, 2016, 54(4): 868-882.

[2] Jankowska U, Latosinska A, Skupien-Rabian B, et al. Optimized procedure of extraction, purification and proteomic analysis of nuclear proteins from mouse brain[J]. Journal of neuroscience methods, 2016, 261: 1-9.
 

HB201214