支原体（mycoplasma）是一种没有细胞壁的最小原核细胞。在细胞培养过程中，支原体污染率达到60%以上，当细胞（特别是传代细胞）被支原体污染后，细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变，污染严重时细胞生长缓慢，细胞形态发生改变，并出现细胞病变。因而细胞培养过程中，防止支原体污染是一个世界性的难题。

图1. 支原体污染细胞后，细胞形态发生改变（来源：该图片来源于网络）

支原体污染细胞后很难察觉，同时若细胞培养过程受到了支原体污染，彻底清除支原体也是非常困难的。因此在细胞培养过程中，定期进行支原体检测，在源头上清除支原体污染，并做好支原体预防工作显得尤为重要。翌圣生物为了全方位的呵护您的细胞免受支原体的污染，除提供支原体检测试剂盒以外，还包括支原体清除试剂和对正常细胞提供支原体预防试剂，以防支原体污染。

 

 

01

支原体检测

目前检测支原体的方法有很多，主要包括：荧光染色法、酶标法、低张处理地衣红染色法、PCR法等。目前YEASEN提供了两款检测试剂盒，包括一步法支原体检测试剂盒和PCR法支原体检测试剂盒，两者均是通过PCR扩增检测支原体的存在。两者实验原理存在差异，但产品性能各有千秋。
一步法支原体检测试剂盒

一步法快速支原体检测试剂盒是利用Yeasen独特的等温扩增技术，同时加入了UDG酶，在极大程度上抑制假阳性反应。主要原理是若细胞培养物被支原体污染，支原体DNA的保守序列会被大量、快速地扩增，使反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

图2. 一步法支原体检测试剂盒灵敏度测试（注：蓝色为阳性，紫色为阴性）

PCR法支原体检测试剂盒

PCR法支原体检测试剂盒，将一步法的1对引物提高至3对引物，所用引物为根据支原体16S-23S rRNA序列保守区域设计通过巢式PCR扩增，只特异性扩增支原体DNA，检出灵敏度与特异性均较高，可以检测低至单个拷贝的支原体。

图3. PCR法支原体检测试剂盒灵敏度测试（注：NTC为阴性，其余为阳性）

一步法和PCR法性能对比

一步法和PCR法检测试剂盒，各有千秋，客户可以根据自己需求，选择合适的试剂盒即可。

图4. 一步法和PCR法产品性能对比

 

 

02

支原体清除

若是检测到细胞受到支原体的污染，需要及时清理来挽救来之不易的细胞。目前YEASEN提供的MycAway™ 支原体去除试剂（1000×），是一种混合抗生素制剂，含有三种对支原体具有抑菌作用的组分，分别是喹诺酮类、四环素衍生物类和大环内酯类抗生素。可通过抑制支原体的DNA和蛋白合成，达到清除支原体的效果，且对细胞毒性低，不影响细胞生长状态。

图5. 清除剂清除效果对比图

支原体去除产品特点：
毒性低：对细胞毒性小，不影响后续细胞实验，如细胞活力检测和细胞转染等；

操作简单：只需将产品添加至支原体污染的培养基中孵育即可；

起效快、周期短：最快3天即可见效，一个周期（大约7天）即可清除干净；

去除范围广：几乎能去除所有类型的支原体。

 

 

03

支原体预防

支原体污染是比较难处理，因此预防就显的尤为重要。主要包括以下几个方面：细胞预防（直接加入细胞培养基中）、超净台预防（喷雾）、水浴锅预防和细胞培养箱水盘预防（直接按比例加入）等。

图6. 不同支原体预防试剂对比

总之，支原体带来的负面影响不容忽视。在细胞培养过程中，我们要定期检测支原体，预防细胞被污染，是细胞培养过程中不可或缺的操作步骤。

 

 

04

支原体试剂相关FAQ

1.如何检测新鲜的培养基和血清是否有支原体污染？
答：把新鲜的培养基或是血清取一定量放在24孔板，于CO2培养箱中培养4d以上（样品），吸取一定的液体进行检测。如果样品的颜色变成天蓝色或者出现PCR扩增条带，则证明含有支原体污染。。

2.一步法检测支原体试剂盒中加入的UDG酶，会影响实验结果吗？比如抑制等温扩增反应，或者导致实验结果假阳性等等。

答：加入的UDG酶在室温下才起作用，而且UDG酶对温度敏感、易于灭活，当进行63°C等温扩增时，UDG酶因为温度过高就会失活，不影响实验结果。

3.支原体清除剂使用周期？

答：一般是1周，如果碰到比较难除尽的，可以适当延长时间至2周。或者按照1:500进行稀释，但是对细胞的毒性会有所增加，具体要看细胞的耐受性。

4.支原体喷雾对于已经污染的组培苗，可以直接喷湿除菌？
答：不可以，只能用于细胞样品。

 

5.相关产品推荐

 

 

产品	货号	规格
支原体检测试剂盒
GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原体检测试剂盒	40601ES10	10 assays
	40601ES20	20 assays
MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit 一步法快速支原体检测试剂盒	40612ES25	25 T
	40612ES60	100 T
支原体去除试剂
MycAway™ Spray (Ready-to-use)支原体喷雾剂（即用型）	40605ES02	500 mL
	40605ES03	2×500 mL
	40605ES08	10×500 mL
Mycoplasma Elimination Reagent MycAway™ 支原体去除试剂（1000×）	40607ES01	100 uL
	40607ES03	1 mL
	40607ES08	5×1 mL
支原体预防试剂
Mycoplasma Prevention Reagent MycAway™支原体预防试剂（2000×）	40608ES03	1 mL
	40608ES08	5×1 mL
MycGuardAH™ -1 Solution (100×) 细胞培养箱水盘1号消毒卫士（支原体污染预防）	40609ES60	100 mL
MycGuard™-2 Solution (500×) 水浴锅2号消毒卫士（支原体污染预防）	40610ES60	100 mL

 

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