—— Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR  (gDNA digester plus)

研发背景

RT-qPCR是一个多步骤连贯实验，逆转录的实验结果只能通过后续qPCR进行判定，因此这一过程的成功与否十分关键。实验过程中，你是否有遇到过这些问题？

1. 逆转录效率低导致后续qPCR实验结果Ct值偏大？

2. RNA具有复杂二级结构或GC含量高导致逆转录失败？

3. 逆转录产品组分多，加样麻烦误差还大？

Hifair^® Ⅲ SuperMix，让逆转录实验更方便、更高效！

Hifair^® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)是基于翌圣Hifair^® Ⅲ Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。该产品可耐受高达65℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录；同时增强了与模板的亲和力，非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。

产品带基因组DNA去除成分，适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，保证了qPCR结果的真实性和可重复性。

产品特点

1. 耐热性：耐受65℃，适合高GC及具有复杂二级结构的RNA模板
2. 高效逆转录：相对市面同类产品具有更高的逆转录效率
3. 宽广的线性检测范围：在宽广模板范围内（Total RNA 10pg-5μg）均可高效合成cDNA
4. 高效去除基因组残留：试剂盒自带组分可高效去除残留基因组，且无需额外失活操作
5. 模板投入量：RNA投入量最多可加12μL，有利于低浓度模板检测
6. 操作简便性：基因组DNA去除与逆转录均设置成mix形式，加样方便，移液误差小
7. 反应时间：逆转录时间15min，反应总时间低于半小时

产品应用

两步法RT- qPCR检测。

产品性能

1. 反应温度55℃，耐受65℃高温

               反应温度55℃可满足常规模板及二级结构模板的逆转录，高GC模板可适当提高到65℃反应

2. 出色的逆转录效率，适合不同GC含量、不同表达丰度的基因

        针对不同GC含量、不同表达丰度的基因，Hifair^® Ⅲ SuperMix相对市面同类产品具有更高的逆转录效率

3. 宽广的模板线性范围内均可高效合成cDNA

Hifair^® Ⅲ SuperMix在很宽的模板范围内均可高效合成cDNA。Total RNA投入量为5pg-5μg，逆转录按说明书标准程序进行，所得cDNA进行qPCR检测。

GAPDH：E=98.47%，R²=0.998；RPS2：E=98.79%，R²=0.998；

AGTPBP1：E=100.08%，R²=0.998；GLUD1：E=100.35%，R²=0.998。

4. 高效去除基因组残留

仅使用试剂盒自带的gDNA digester Mix就可以高效去除RNA模板中残留基因组，且无需失活操作，Hifair^® Ⅲ SuperMix可充分抑制gDNA digester活性。

Positive control：25ng Mus gDNA作为模板进行qPCR检测。

实验1：25ng Mus gDNA，按说明书标准程序进行gDNA去除后逆转录，所得产物进行qPCR检测。

实验2：25ng Mus gDNA，同时加入gDNA digester Mix和Hifair® Ⅲ SuperMix处理，按说明书程序逆转录后进行qPCR检测。

5. RNA最大投入12μL，有利于低浓度模板检测

客户使用情况

产品上市以来，短短一个月内已得到广大用户认可— 使用客户数量300+

主要有：中国科学院上海生命科学研究院，北京大学，中国农业大学，清华大学，华东理工大学，上海交通大学，复旦大学，华中农业大学，浙江大学，中国药科大学，武汉大学，中山大学，东南大学，南京林业大学，华南农业大学，南京农业大学，南方医科大学，中国农业科学院中国水稻研究所，中国科学院水生生物研究所，暨南大学，中科院健康科学研究所，中国科学院动物研究所，华东师范大学，同济大学，中国科学院微生物研究所，第二军医大学，上海市东方医院，上海植物逆境生物学研究中心，中国农业科学院上海兽医研究所，中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，浙江大学医学院附属第二医院，中国科学院植物研究所，中国科学院南京土壤研究所，中国科学院遗传与发育生物学研究所，中国科学院上海有机化学研究所，中国科学院生物物理研究所，中国科学院南海海洋研究所，浙江省农业科学院等单位的课题组。

常见问答

Q：Hifair^® Ⅲ SuperMix后续只能用于qPCR实验吗？

A：推荐用于qPCR实验，常规长度基因克隆实验也可以用。

Q：为什么说Hifair^® Ⅲ SuperMix操作误差更小，重复性更好？

A：Hifair^® Ⅲ SuperMix只有3个组分，且每个组分的添加体积均超过1μL，因此移液误差更小，重复性更好。

Q：Hifair^® Ⅲ SuperMix逆转录反应的温度应设置为多少？

A：常规模板55℃即可，如果是具有复杂二级结构的模板或高GC含量的模板，可将温度适当提高至65℃，有利于提高逆转录效率。

Q：Hifair^® Ⅲ SuperMix操作时可以不进行gDNA去除这一步吗？

A：可以省略。

Q：为什么Hifair® Ⅲ SuperMix更有利于低浓度模板检测？

A：一是该产品增强了与模板的亲和力，二是由于组分的设置，使得RNA最大投入量可以达到12μL，对于低浓度模板可通过增大投入体积来增大模板投入量。

YEASEN逆转录产品部分已发表文献

1. Wang J, Ge P, Qiang L, et al. The mycobacterial phosphatase PtpA regulates the expression of host genes and promotes cell proliferation[J]. Nature communications, 2017, 8(1): 244. [ IF 12.353]

2. Nie, W., et al., Three-dimensional porous scaffold by self-assembly of reduced graphene oxide and nano

hydroxyapatite composites for bone tissue engineering[J]. Carbon, 2017.116, 325-337. [ IF7.082]

3. Li A, Liu Q, Li Q, et al. Berberine reduces pyruvate-driven hepatic glucose production by limiting mitochondrial import of pyruvate through mitochondrial pyruvate carrier 1[J]. EBioMedicine, 2018, 34: 243-255.[ IF6.68]

4. Zhu Y, Song D, Xu P, et al. A HD‐ZIP III gene, PtrHB4, is required for interfascicular cambium development in Populus[J]. Plant biotechnology journal, 2018, 16(3): 808-817. [ IF 6.305]

5. Yu S L, Wu J C, Liu P F, et al. Up-regulation of RNF187 induces hepatocellular carcinoma cell epithelial to mesenchymal transitions[J]. Oncotarget, 2017, 8(60): 101876. [ IF 6.18]

6. Yu X, Hu L, Li S, et al. Long non-coding RNA Taurine upregulated gene 1 promotes osteosarcoma cell metastasis by mediating HIF-1α via miR-143-5p[J]. Cell death & disease, 2019, 10(4): 280.[ IF 5.959]

7. He L, Fan X, Li Y, et al. Overexpression of zinc finger protein 384 (ZNF 384), a poor prognostic predictor,

promotes cell growth by upregulating the expression of Cyclin D1 in Hepatocellular carcinoma[J]. Cell death &

disease, 2019, 10(6): 444.[ IF 5.959]

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