在NGS建库中，最终的文库质量受到多种因素的影响，概括起来可以分为三类，起始样本质量、建库试剂盒质量、建库过程中操作人员的手法，而在建库步骤种，连接模块的连接模块无疑是至关重要的，打个比方，如果更多的样本两端都连接上接头，则可以在FlowCell上通过桥式扩增形成簇，完成测序过程，可以说，接头连接效率直接影响着最终测序数据的文库转化率、文库复杂度、均一性、准确性和覆盖度。

传统的连接酶在连接受到多重因素的限制：

1）连接效率低：最高只能达到60%；

2）不稳定：针对不同接头的连接效率差异大；

3）样本适用性低：FFPE等样本连接效率低于其他类型样本。

翌圣Fast DNA连接酶在多种突变体中筛选而得，去除核酸酶、切口酶、磷酸酶的残留，采用高纯度标准生产和严格的质量检测，从而保证性能。该酶不仅能够催化平末端或粘性末端之间的连接反应，还可修复dsDNA、dsRNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切口。

1）卓越的连接效率：高达80%；

2）适用于多种连接接头：兼容华大和Illumina测序平台接头；

3）适用多种样本：适用于FFPE、cfDNA等样本；

4）应用广泛：可应用于NGS建库、分子克隆、大片段连接；

5）严格质控：严格批次间稳定性控制。

1）更高的连接效率

使用12199ES/Hieff NGS^® Ultima DNA Library Prep Kit构建PCR free文库，样本为 170bp cfDNA模拟物（16种PCR产物混合），进行Agilent 2100进行文库检测，结果如下：

170 bp fragment PCR-free library谱峰指认：

①未连接接头产物

②单端接头连接产物

③双端接头连接产物

④残留接头

样本制备方法：使用170 bp多重PCR产物作为cfDNA模拟品，该PCR产物经过设计，3’端含有所有碱基的组合（共16种）。

【注】连接效率测评方法：使用固定长度的DNA片段构建PCR free文库，文库在连接接头后进行Agilent 2100检测，计算双端连接接头的文库片段占总片段的比例。

2）文库产量好

使用DNA建立试剂盒进行文库构建，更换不同得连接模块，对比最终文库产量，结果如下：