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细胞污染防治妙招攻略(预防与去除)

 

 

攻略一:了解细胞污染

 

古人云:知己知彼方可百战百胜,因此了解细胞污染是非常重要的。常见的污染类型有细菌污染、真菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、病毒污染以及非同种细胞污染。

 

1、细菌:细菌在普通倒置显微镜高倍镜下大多可见,根据感染细菌种类不同,呈现不同的外形。其培养基一般会变浑浊、变黄较快,对细胞生状态影响明显。

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图1:细胞受到细菌污染图

2、真菌:真菌污染在显微镜下可以看到丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,呈珊瑚状,随时间转移会长出黑色丝状物。真菌生长的比较慢,一般培养基清亮,不变色,不如细菌易被发现,一旦发现有它的存在,细胞污染就比较严重了,也很难救活。

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图2:细胞受到真菌污染图

 

3、支原体:细菌和真菌造成的污染相对容易发现,然而支原体造成的污染很难察觉,即使生长密度高达107-109CFU/ml,也很难有污染迹象(浑浊、pH变化等)。支原体污染后导致细胞生长变慢,状态变差,不会马上使细胞致死,但会影响细胞内的各种参数,如改变细胞新陈代谢,改变DNA转染效率。支原体感染细胞以后,细胞病变不明显,只是慢慢死去。

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图3:细胞受到支原体污染图

 

 

 

4、黑胶虫*:一般低倍镜下观察呈黑色点状,高倍镜下可看见黑色物蠕动,培养液不易变浑浊,在细胞增殖旺盛之后会减少或消失。有时也会出现观测到的运动物明显增多,细胞状态变差,最终死亡。*于黑胶虫没有明确的定论,通常认为黑色物是由于多种原因导致细胞状态变差、死亡产生的碎片

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图4:细胞受到黑胶虫污染图

 

5、原虫*:该污染在显微镜下易观察到,轻微活动,细胞能生长但繁殖速度明显减慢,培养基产生浑浊,细胞状态差,边缘不清楚,细胞不透亮。其能与细胞共生并争夺培养基营养,当到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,导致细胞死亡。(*对于原虫污染倾向于是细菌类污染)

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图5:细胞受到原虫污染图

 

6、病毒:由于病毒过小导致培养过程中难以观察。由于在获得原代细胞过程中没有完全除去潜在的病毒,导致病毒污染。尽管病毒污染对细胞原代培养不会造成太大影响,但对下游工业生产如生产疫苗等造成安全隐患,因此需要尽量去除。

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图6:病毒入侵猴肝脏细胞层图像(图 源自悉尼大学)

7、非同种细胞污染 :这个主要指不同种类细胞产生的交叉污染,由于细胞培养过程中不同种类细胞株所需器材和溶液没有严格分开,导致细胞交叉污染。据报道,世界上已有多种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效,因此避免非同种细胞污染也需要引起实验者的重视。

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图7:细胞受到非同种细胞污染图

 

 

攻略二:污染的预防

 

 

细胞污染是比较难处理,因此预防就显的尤为重要。对于预防可从以下几方面着手:

1、 使用抗生素对细胞培养基使用双抗(在细胞培养基中推荐青霉素的工作浓度为100U/ml,链霉素为0.1mg/ml。)

2、 支原体预防:可以使用支原体预防试剂预防支原体的污染产生。

3、培养器材、用品需消毒灭菌:细胞培养所用器材要清洗消毒,各种溶液灭菌处理。

4、实验操作者的无菌意识

①洗手消毒,穿隔离衣。工作开始时要用酒精棉球擦手并对器皿进行酒精擦拭;

②操作需在生物安全柜内并佩戴口罩;

③尽量使用一次性无菌器材操作,对于多次使用的需实高压灭菌处理。实验完毕用酒精擦拭操作台面。

5、细胞交叉污染的预防

①一次对多种细胞培养操作时,所用器具要严格区分;

②在进行换液或传代操作时尽量避免液体溅出污染其他细胞;

③新购细胞应及时留种冻存,如遇污染可重新复苏。

6、无菌室或细胞房的污染预防

①使用0.1%新洁尔灭对细胞房或无菌室进行全面彻底擦洗;

②使用紫外灯长时间(0.5-2h)照射;

③使用甲醛熏蒸法。

 

 

攻略三:污染的去除

 

细胞培养过程中难免会遇到细胞污染,怎么办??

1、多数污染是较难完全去除,如果污染的细胞非珍贵且有备用,宜舍弃;

2、找到污染源后并清除掉,可复苏冻存细胞或重新购置细胞培养; 

3、若污染细胞很珍贵,一时难觅新,针对不同污染小翌给您如下建议。

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攻略四:相关推荐

 

 

 

类型

产品名称

货号

规格

抗细菌

Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell Culture

 细胞培养用青霉素-链霉素(双抗)

60162ES76

100 mL

特美汀 Timentin

60230ES07/60

3.2/100g

硫酸庆大霉素 Gentamycin Sulfate Salt

60214ES03/08/25

1/5/25g

Metronidazole 甲硝唑(灭滴灵)

60223ES25/60

25/100mg

抗真菌

Amphotericin B 两性霉素B

60238ES01/03

100mg/1g

Nystatin 制真菌素

60219ES08

5g

金担子素A (AbA) Aureobasidin A

60231ES03/08

1/5mg

支原体检测

GMyc-PCR支原体检测试剂盒

40601ES10/20

10 /20 assays

一步法快速支原体检测试剂盒

40611ES25/60

25/100T

支原体去除

MycAway™  Spray (Ready-to-use) 支原体喷雾剂(即用型)

40605ES02/03/08

1/2/10×500ml

MycAway™ Treatment (1000×) - Mycoplasma Elimination Reagent

支原体去除试剂(1000×)

40607ES03/08

1/5ml

支原体预防

MycAway™ Prophylactic (2000×) - Mycoplasma Prevention Reagent

支原体预防试剂(2000×)

40608ES03/08

1/5ml

MycGuard™-1 Solution (100×)

细胞培养箱水盘1号消毒卫士(支原体污染预防)

40609ES60

100ml

MycGuard™-2 Solution (500×) 

水浴锅2号消毒卫士(支原体污染预防)

40610ES60

100ml

 

 

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400-6111-883